Ремонт коробки передач на ВАЗ 2101-ВАЗ 2107
Добро пожаловать!
Коробка передач – на классике она бывает разных видов начиная от 4-х ступенчатой коробки и заканчивая 5-ти ступкой, но все же ремонт этих двух видов коробки чем то похож между собой, но чтобы вам всё таки было более понятнее, мы сделали статью на основе ремонта 5-ти ступенчатой коробки, и в добавок к ней было приложено в самом конце два видео-ролика, один из которых направлен на ремонт 4-х ступки, а другой на ремонт 5-ти ступки. (Мы напоминаем то что ремонт обоих этих коробок очень похож, поэтому если вы что то не понимаете тогда смотрите видео-ролик или же смотрите статью или же пишите свой вопрос в комментариях и мы вам на него обязательно в ближайшее время ответим)
Примечание!
Для ремонта коробки вам нужно будет взять с собой: Два разных вида отвёрток в которой будет входить крестообразная и плоская отвёртка, а так же нужно будет запастись набором головок «на 13» и «на 17» и к этим головкам нужен так же удлинитель, либо вороток для отворачивания труднодоступных гаек!
А так же для ремонта вам нужно запастись: Ударно поворотной отвёрткой (Если вы не знаете что это за отвёртка, тогда читайте статью под названием: «Подробная информация про ударно поворотную отвёртку», там всё подробно сказано), ещё запаситесь набором гаечных ключей в который будут входить два ключа «на 13» , а так же ключи «на 10», «на 17», «на 19» и «на 27»!
Для ремонта вам так же понадобиться: Съемник стопорных колец, или же вместо него можно будет использовать тоненькие плоскогубцы, а так же нужно будет запастись молотком и по возможности так же необходимо будет запастись несколькими универсальными съемниками для снятия эластичной муфты и других деталей! (Более подробнее о том какие именно съёмники нужны, смотрите на фото располагающемся в пункте: 16, 20)
Краткое содержание:
Когда нужно ремонтировать коробку передач?
Она подлежит ремонту при:
Повышения шума работы коробки, которые могут быть вызваны: Износом подшипников, а так же износом самих зубьев шестерен или износом зубьев синхронизаторов, или увеличением осевого перемещения валов.
Коробка так же нуждается в ремонте при затруднённом переключении передач, которое может быть: Из-за износа сферического шарнира рычага переключения, из-за отсутствие смазки в коробки (В данном случае просто залейте масло в коробку, о том как залить масло вы узнаете чуть ниже в рубрике «Разборка»), из-за деформации самого рычага переключения, из-за появления заусенцев, из-за погнутости деталей, из-за загрязнения гнезд штоков, из-за заклинивания блокировочных сухарей, из-за загрязнении шлицев скользящей муфты и ступицы, из-за деформация самих вилок переключения передач.
Ещё коробка требует ремонта при её самопроизвольном выключении во время езды, или при нечётком включении самих передач из-за которых так же в свою очередь передача коробки может самопроизвольно выключаться.
Примечание!
Самопроизвольное отключение передать может быть связано с: Износом лунок под шарики на штоках, а так де с поломкой пружин различных фиксаторов, из-за износа блокирующего кольца синхронизатора, из-за поломки самой пружины синхронизатора, из-за износа зубьев муфты синхронизатора или зубчатого венца этого синхронизатора!
А так же коробка требует ремонта, при обнаружении утечки из неё масла, которая в своё время может быть вызвана: Ослаблением крепления картера сцепления к картеру коробки, а так же из-за износа сальников первичного и вторичного валов, а так же из-за ослаблении крепления крышек картера коробки передач или из-за повреждения уплотнительных прокладок!
Примечание!
В основном все эти неисправности могут быть так же вызваны и другими причинами, например из-за износа сцепления или маховика при трогании коробка передач может так же колебаться, поэтому прежде чем сразу переходить к снятию и разборке коробки, убедитесь что дело действительно именно в ней, потому что снятие и разборка это процесс очень долгий и трудоёмкий которым нужно заниматься только в том случае, если вы уверены на 100% то что дело всё действительно в коробке!
Как отремонтировать коробку на ВАЗ 2101-ВАЗ 2107?
Разборка:
1) В начале операции снимите саму коробку и выжимной подшипник с первичного вала коробки.
Примечание!
В некоторых случаях коробку снимать не приходиться, а бывает то что она просто лежит в гараже, поэтому после проделывания 1-ой операции, то есть снятия выжимного подшипника, проверьте есть ли масло в коробки, если масло есть тогда слейте его! (О том как слить масло, см. в статье: «Замена масла в коробки». Чуть ранее мы говорили в рубрике под названием: «Когда нужно менять коробку на автомобиле?», о том как нужно заливать масло и пообещали чуть ниже объяснить как это всё же делается, так вот в ссылки направленной на замену масла которая расположена чуть выше, вы найдёте информацию по сливанию, а так же по заливании масла в коробку)
2) Далее аккуратно подденьте отвёрткой чехол вилки выключения сцепления и отведите его в сторонку тем самым оставив его висеть на вилки. Теперь когда чехол снят поверните вилку на 90°и тем самым снимите её совместно с этим чехлом.
3) Затем отверните все внутренние гайки которые крепят картер сцепления, а после отворачивания извлеките все их и снимите аккуратно пружинные шайбы который под этими гайками находятся и отложите в сторонку.
4) Следом когда гайки все вывернуты а шайбы сняты, потяните за картер сцепления и тем самым отсоедините его от коробки.
Примечание!
Сразу же за картером располагается уплотнительная прокладка, её тоже нужно снять, а так же нужно будет снять пружинную шайбу которая указана стрелкой!
5) Теперь отверните гаечным ключом десять гаек которые крепят нижнюю крышку к картеру коробки, а после отворачивания снимите все гайки и пружинные шайбы которые под ними находятся. Когда все гайки и шайбы будут сняты, снимите и саму нижнюю крышку.
6) Далее когда нижняя крышка картера будет снята, подденьте отвёрткой прокладку самого картера коробки и после чего снимите её со всех шпилек.
7) Затем отверните гайки которые указаны на фото ниже, так вот эти гайки крепят подушку задней подвески двигателя к самому картеру коробки, поэтому после отворачивания гаек снимите сперва шайбы которые под ними находятся, а затем снимите и подушку с картера коробки которая идёт в сборе с поперечиной.
8) Теперь при помощи головки и удлинителя отверните гайку которая крепит привод спидометра к картеру коробки, а когда гайка будет вывернута, снимите данный привод с картера коробки.
9) Следом переверните коробку на другую строну и после чего отверните гаечным ключом или же лучше торцевым, выключатель фонаря заднего хода.
10) После чего отверните болт который крепит саму вилку переключения третей и четвёртой передачи.
11) Далее включите потянув за основной рычаг или как его ещё называют за кулису и после этого включите первую передачу на коробки… (Продолжение в пункте 12)
12) А тем временем так же включите 4-тую передачу, для этого при помощи отвёртки сдвиньте саму муфту синхронизатора в бок чтобы она соединилась с шестерёнкой.
Примечание!
Одновременное включение двух передач, нужно для того чтобы валики находящиеся в коробки не проворачивались!
13) Затем при помощи съёмника стопорных колес, подденьте одно из колец вторичного вала, а после поддевания снимите его.
14) Следом возьмите в руки молоток и отвёртку и при помощи них, относительно не сильными ударами разогните стопорную пластину гайки которая крепит фланец.
15) Теперь отверните на два, три или более оборота гайку крепления фланца муфты, для того чтобы немного сдвинуть центрирующее кольцо этой муфты, а после того как вы сдвиньте кольцо заверните гайку.
16) Далее при помощи специального съёмника спрессуйте данное кольцо муфты.
17) После спрессовки снимите уплотнитель центрирующего кольца.
18) Затем отверните гайку которая крепит фланец муфты, а после отворачивания снимите гайку и отложите её.
19) После чего снимите стопорную шайбу которая располагается за самой гайкой крепления фланца эластичной муфты.
20) Теперь при помощи ещё одного съёмника, установите его сперва как нужно на фланец эластичной муфты, а после чего снимите фланец со шлицевой части вала.
21) Следом поставьте основной рычаг коробки, в нейтральное положение и после чего сдвиньте вверх манжету которая указана стрелкой.
22) После чего отверните гаечным ключом три гайки, которые крепят кулису, а после их отворачивания снимите сперва сами гайки, затем пружинные шайбы которые под ними располагаются и потом саму кулису.
Примечание!
После снятия кулисы со шпилек, обратите внимание на то что под ней располагается уплотнительная прокладки, которую тоже нужно будет снять!
23) Затем переберитесь к гайкам которые крепят кронштейн приёмной трубы, а после нахождения отверните их, и так же снимите располагающиеся под ними пружинные шайбы и после чего снимите сам кронштейн.
Примечание!
Когда кронштейн будет снят, снимите располагающийся под ним закладной болт!
24) Следом отверните пять наружных гаек которые крепят заднюю крышку коробки.
Примечание!
Всего заднюю крышку коробки крепят шесть гаек, пять из них крепят её снаружи и одна крепит её изнутри, и располагается она под кронштейном приемной трубы! (Более подробное отворачивание внутренней гайки, см.
в 25 пункте чуть ниже)
Ещё один нюанс, самую верхнюю гайку крепления задней крышки вам не удастся полностью отвернуть если крышка будет находиться в исходном положении!
25) Теперь отверните накидным или гаечным ключом гайку крепящую с внутренней стороны заднюю крышку, а после отворачивания снимите располагающуюся под ней шайбу.
26) Далее разъедините между собой заднюю крышку и картер коробки, для этого на максимально возможное расстояние отодвиньте заднюю крышку, и после чего окончательно выверните верхнюю гайку её крепления, и после чего снимите пружинную шайбу которая под этой гайкой располагается.
27) Затем когда все гайки откручены, потихоньку начните отводить заднюю крышку от картера покачивая её на градусов 20°, и тем самым полностью отсоедините её от картера коробки.
Примечание!
Покачивать данную крышку нужно для того, чтобы исключить её задевания за блок шестерёнок заднего хода!
Совет:
Чтобы задняя крышка легче отсоединилась, для этого сперва отодвиньте её для доступа к штокам и после чего отвёрткой включите 2-ю передачу и крышка намного легче снимется!
28) После чего снимите внутреннее кольцо со вторичного вала, а после него снимите ведущую шестерню привода спидометра которая указана стрелкой.
29) Теперь разыщите крышку фиксаторов и после чего отверните два болта которые её крепят. А когда болты будут вывернуты, снимите крышку совместно с болтами.
Примечание!
Под крышкой фиксаторов находится прокладка, которую нужно тоже снять со шпилек!
30) Следом извлеките и вследствие чего снимите все пружины фиксаторов.
31) После чего переверните коробку и выньте все шарики фиксаторов.
32) Далее разыщите шарик фиксатора ведущий шестерни спидометра и после чего поддев отвёрткой так же снимите его, а так же снимите маслоотражательную шайбу которая указана стрелкой.
33) Затем проверьте включены ли у вас сразу две передачи, если нет тогда включите их. Когда обе передачи будут включены, отверните болт который крепит блок шестерён 5-той передачи.
34) Теперь так же отверните болт который крепит вилку включения 5-той передачи и заднего хода, а после отворачивания снимите вилку.
35) Следом возьмитесь рукой за шток включения 5-той передачи и передачи заднего хода и после чего извлеките шток из картера и вилки включения.
36) После чего рукой снимите блок шестерён передачи заднего хода и 5-той передачи.
Примечание!
После снятия блока шестерён, так же снимите вилку включения передачи заднего хода и 5-той передачи!
37) Далее снимите втулку шестерни со вторичного вала.
Примечание!
Во время снятия втулки, так же снимите саму шестерню, совместно с ней зубчатый венец, а так же блокирующее кольцо и ко всему этому ещё и муфту синхронизатора 5-той передачи!
38) После этого снимите ступицу муфты синхронизатора 5-той передачи.
39) Затем снимите промежуточную шестерню заднего хода.
Примечание!
После снятия промежуточной шестерни, так же снимите шестерню заднего хода со вторичного вала!
40) Теперь с внутренней стороны картера коробки, выпрессуйте задний подшипник промежуточного вала, нанося по нему легкие удары отвёрткой или бородком.
41) Следом снимите дистанционную втулку со вторичного вала, а так же снимите наружное кольцо заднего подшипника которое указано красной стрелкой, а так же снимите внутреннее кольцо заднего подшипника которое указано синей стрелкой.
42) Далее при помощи съёмника стопорных колец, разожмите стопорное кольцо переднего подшипника и после чего снимите его.
43) Затем включите одновременно первую и 4-тую передачу, а после этого отверните болт который крепит подшипник промежуточного вала.
Примечание!
При извлечении данного болта, обратите внимание на то что он снимается с пружинкой и вместе с зажимной шайбой!
44) Теперь установите отвёртку таким образом, чтобы она встала между наружным кольцом подшипника и шестерней вала, и после чего использовав отвёртку как рычаг извлеките наружное кольцо подшипника вместе с шариками и передним внутренним кольцом.
45) Далее опять действую отвёрткой как рычагом, спрессуйте заднее внутреннее кольцо подшипника.
Примечание!
Рекомендуется делать отметки на передних кольцах подшипника промежуточного вала, для того чтобы при обратной сборке коробки передач их установить на прежние места!
46) Следом извлеките промежуточный вал из картера коробки.
47) После чего переверните коробку передач и тем самым выньте из неё блокировочный сухарь штока включения третий и 4-той передачи.
48) После чего выдвинете немного сам шток включения третей и 4-той передачи.
Примечание!
Шток выдвигайте для того, чтобы можно было из него беспрепятственно извлечь промежуточный блокировочный сухарь!
А так же помните одну вещь, оба сухаря по размеру разные, поэтому сухарь штока включения 1-вой и 2-рой передачи более длинный (На фото находиться слева), чем сухарь штока включения третей и 4-той передачи который находиться на фото справа:
49) После извлечения сухаря извлеките и тем самым снимите шток включения третей и 4-той передачи.
50) Затем снимите вилку включения третей и 4-той передачи.
51) После чего отверните болт который крепит вилку включения 1-вой и 2-рой передачи.
52) Когда болт будет вывернут, извлеките из картера шток включения 1-вой и 2-рой передачи.
53) Теперь возьмите картер коробки в руки и переверните его, а после переворачивания выньте блокировочный сухарь штока включения 1-вой и 2-рой передачи.
54) Далее снимите вилку включения 1-вой и 2-рой передачи.
55) Следом снимите первичный вал в сборе.
56) И после чего извлеките игольчатый подшипник.
57) Затем при помощи ударно поворотной отвёртки ослабьте затяжку 3-х винтов которые крепят стопорную пластину промежуточного подшипника и ось промежуточной шестерёнки заднего хода. После ослабления затяжки, воспользуйтесь обычной отвёрткой и выверните все винты.
58) Теперь разверните стопорную пластину, для того чтобы она вышла из паза оси который указан стрелкой.
59) После того как пластина выйдет из паза, снимите ось шестерни заднего хода и саму пластину которая указана стрелкой.
60) Далее возьмите в руки съёмник стопорных пластин и с его помощью снимите промежуточное кольцо вторичного вала.
61) Теперь с помощью отвёртки подденьте и после чего снимите шпонку с паза вторичного вала.
62) Следом воспользуйтесь отвёрткой как рычагом и с её помощью снимите промежуточный подшипник со вторичного вала.
63) Затем утопите вторичный вал во внутреннюю часть картера коробки и после чего потянув его вверх, снимите его.
64) Далее лёгкими ударами выпрессуёте подшипник вторичного вала из задней крышки картера коробки.
Примечание!
При выпрессовки будьте осторожны, не потеряйте стопорное кольцо которое находиться между подшипником и сальником!
65) После того как подшипник и стопорное кольцо сняты, перейдите к снятию сальника, для этого просто его извлеките из крышки коробки.
66) И в завершение зажмите тисками блок шестерён 5-той передачи и после чего снимите подшипник с кольца, воспользовавшись отвёрткой как рычагом.
Примечание!
При снятии подшипника, опирайте отвёртку прилагая усилие лишь к его внутреннему кольцу!
А так же все снятые детали проверьте на исправность по необходимости их замените! (О том как проверить детали на исправность, см. в статье: «Проверка деталей коробки передач на исправность на ВАЗ»)
Сборка:
Вся сборка производиться в обратной последовательности.
Дополнительные видео-ролики:
Ниже размещёно два видео-ролика, один из которых направляет на ремонт 5-ти ступенчатой коробки (Располагается чуть ниже на верху), а другой направляет на ремонт 4-х ступки (Располагается чуть ниже в самом низу):
http://www.youtube.com/watch?v=QjSnegXiVE8&feature=youtu.be
В большинстве случае проблемы с КПП устраняются путем ее демонтажа и разборки. Не беритесь за подобную работу, не обладая должными навыками и опытом.
Демонтаж
Чтобы демонтировать коробку, рекомендуем вам опираться на инструкцию, четко следовать последовательности и закреплять навыки наглядными видео.
- Отключите минусовую клемму с аккумулятора, слейте из системы КПП масло.
- Открутите болты, которые удерживают защиту картера, и снимите ее.
- От картера сцепления отключите массу (провод).
- На наконечнике троса привода сцепления немного ослабьте натяжение гаек.
- С рычага сцепления снимите наконечник троса.
- Отключите колодку от тягового реле.
- Отключите провод, идущий на тяговое реле стартера.
- Демонтируйте непосредственно сам стартер.
- Отключите тягу привода от наконечника шарнира.
Речь идет о тяге, которая осуществляет переключение скоростей. - Отсоедините трос от привода спидометра автомобиля.
- Открутите крепление шарового шарнира рулевой тяги.
- Извлеките, выпрессуйте палец шарнира рулевой тяги из поворотного рычага стойки.
- Хвостовик внутреннего ШРУСа привода передних колес следует выдавить и отвести в сторону.
- Отключите второй ШРУС.
- Демонтируйте щит картера сцепления.
- Освободите коробку переключения передач от креплений, удерживающих ее на двигателе.
- Снимите коробку.
Аккуратно снимаем КПП
Обязательно перед непосредственным снятием коробки отведите ее в горизонтальной плоскости от мотора. Затем выведите из зацепления первичный вал. Внимательно следите за тем, чтобы не повредились лепестки от пружины сцепления.
Разбирая коробку на части, обязательно обращайте внимание на состояние элементов. Если вовремя обнаружить неисправности и заменить компоненты КПП, можно обойтись недорогим, но очень эффективным самостоятельным ремонтом.
Разобранная КПП
На что обратить внимание
Итак, следуя инструкции, разбираем КПП вашего ВАЗ 2109.
Попутно обращаем внимание на следующие моменты:
- Подшипники. При их износе возникает гул коробки. Плюс изношенные подшипники негативно влияют на состояние прочих элементов КПП;
- Синхронизаторы и уплотнительные шайбы. Если их состояние оставляет желать лучшего, то передачи плохо переключались именно из-за них. Замените их;
- Система сцепления, сухари, фиксаторы ступицы муфты. Все это подлежит отдельной замене при наличии следов износа, дефектов;
- Блокирующие кольца, синхронизаторы. При наличии сколов, зазубрин даже и не думайте над альтернативными решениями, сразу меняйте;
- Дорожки подшипников. Со временем они изнашиваются. При обнаружении следов выработки выполните полную замену. В таком состоянии им осталось совсем чуть-чуть до поломки;
- Зазор между шестеренками и блокирующими кольцами. В норме он составляет не меньше 0,6 мм. При отклонениях решение одно — замена колец;
- Стопорные кольца. При потере упругости эти элементы следует обязательно менять, поскольку свои функции они более выполнять не смогут.
Собирая КПП, не забудьте смазать новые прокладки слоем литола. А при запрессовке сальников делайте это рабочей кромкой внутрь. Металлическая обойма должна располагаться с наружной стороны.
В процессе обратной сборки коробки передач следует обрабатывать все трущиеся компоненты маслом, не забывать про герметик для соединения картеров сцепления и КПП. Сделать все своими руками вполне реально.
Загрузка …Разборка и сборка коробки передач ВАЗ-2107
При разборке коробки желательно любым способом маркировать, или запоминать где какая деталь стояла, потому как многие детали схожи.
При установке новых деталей нужно учитывать зазоры и притертость смежных деталей.
Разборка и ремонт коробки передач требуются при следующих неисправностях:
Повышенный шум в коробке передач:
— износ подшипников;
— износ зубьев шестерен и синхронизаторов;
— осевое перемещение валов.
Затрудненное переключение передач:
— износ сферического шарнира рычага переключения передач, отсутствие смазки в узле;
— деформация рычага переключения передач;
— заусенцы, погнутости, загрязнение гнезд штоков, заклинивание блокировочных сухарей;
— загрязнение шлицев скользящей муфты и ступицы;
— деформация вилок переключения передач.
Самопроизвольное выключение или нечеткое включение передач:
— износ лунок под шарики на штоках, поломка пружин фиксаторов;
— износ блокирующего кольца синхронизатора;
— поломка пружины синхронизатора;
— износ зубьев муфты синхронизатора или зубчатого венца синхронизатора.
Пониженный уровень или утечка масла:
— износ сальников первичного и вторичного валов;
— ослабление крепления крышек картера коробки передач, повреждение уплотнительных прокладок;
— ослабление крепления картера сцепления к картеру коробки передач.
Рассмотрим ремонт четырехступенчатой коробки передач.
Ремонт пятиступенчатой коробки в основном не отличается, за исключением некоторых деталей. Ремонт пятиступенчатой коробки рассмотрим в следующей статье Ремонт пятиступенчатой коробки передач ВАЗ-2107
Тщательно очищаем от грязи, моем картер коробки передач щеткой и горячей водой с моющим средством снаружи и ставим ее на верстак картером сцепления вниз.
Двумя отвертками разводим секторы распорной втулки
снимаем ее и резиновую втулку демпфера.
Снимаем эластичную муфту и фланец со вторичного вала коробки передач
Головкой «на 13» отворачиваем две гайки крепления опоры
снимаем опору
Головкой «на 10» отворачиваем гайку крепления привода спидометра.
..и снимаем его.
Ключом «на 22» отворачиваем выключатель света заднего хода.
…и снимаем его.
Ключом «на 13» отворачиваем упор перемещения рычага переключения передач
Ключом «на 13» отворачиваем две гайки крепления кронштейна
Снимаем кронштейн и вынимаем болт с квадратной головкой
Ключом «на 13» отворачиваем остальные гайки крепления задней крышки коробки передач
Снимаем заднюю крышку, передвинув рычаг переключения вправо, чтобы освободить его от штоков включения передач
Осторожно, стараясь не повредить, снимаем прокладку задней крышки
Снимаем задний подшипник
Снимаем ведущую шестерню привода спидометра и ее фиксатор – стальной шарик
Головкой «на 10» отворачиваем болт крепления вилки включения передачи заднего хода
Снимаем вилку включения заднего хода и промежуточную шестерню заднего хода
Снимаем со штока включения заднего хода дистанционную втулку
Съемником снимаем стопорное кольцо с промежуточного вала
Снимаем ведущую шестерню заднего хода и пружинную шайбу
Съемником снимаем стопорное кольцо со вторичного вала
Снимаем ведомую шестерню заднего хода и пружинную шайбу
Ударной отверткой отворачиваем четыре винта крепления стопорной пластины подшипника и оси промежуточной шестерни заднего хода.
Снимаем стопорную пластину.
Вынимаем ось промежуточной шестерни заднего хода
Головкой «на 10» отворачиваем десять гаек крепления нижней крышки
29. Снимаем крышку с прокладкой.
Кладем коробку передач на бок.
Головкой «на 13» отворачиваем одну гайку,..
…а головкой «на 17» – шесть гаек крепления картера сцепления к коробке передач
Разъединяем картеры и снимаем прокладку.
Ключом «на 13» отворачиваем два болта крепления крышки фиксаторов штоков
Снимаем крышку и извлекаем из отверстий три пружины и три шарика
Вынимаем шток вилки включения заднего хода.
Головкой «на 10» отворачиваем болт, крепящий вилку включения III и IV передач
Выдвигаем штоки, одновременно удаляя блокировочные сухари
Полностью вынимаем шток вилки включения III и IV передач
Головкой «на 10» отворачиваем болт, крепящий вилку включения I и II передач.
Вынимаем шток вилки включения I и II передач.
Нажав на муфты, включаем сразу две передачи и ключом «на 19» отворачиваем болт крепления переднего подшипника промежуточного вала.
Поддев двумя отвертками за стопорное кольцо, вынимаем передний подшипник промежуточного вала
Выталкиваем наружу задний подшипник промежуточного вала
Наклонив, вынимаем промежуточный вал из картера коробки передач.
Вынимаем две вилки переключения передач.
Поддев отверткой, вынимаем первичный вал в сборе с подшипником и кольцом синхронизатора.
Снимаем игольчатый подшипник со вторичного вала.
Поддев отверткой, извлекаем шпонку с задней части вторичного вала.
Поддев двумя отвертками, снимаем задний подшипник вторичного вала
Вынимаем вторичный вал из картера коробки передач.Вертикально устанавливаем вторичный вал, зажав его в тисках через картонные прокладки
Снимаем муфту синхронизатора III и IV передач.
Съемником снимаем стопорное кольцо…
…и снимаем ступицу синхронизатора и пружинную шайбу
Поддев отверткой, снимаем стопорное кольцо, а также блокирующее кольцо синхронизатора и пружину синхронизатора.
Снимаем шестерню III передачи
Оперев шестерню I передачи на жесткое основание, молотком через проставку из мягкого металла выбиваем вторичный вал и снимаем с него шестерню II передачи в сборе, муфту синхронизатора I и II передач, ступицу синхронизатора, шестерню I передачи и втулку шестерни I передачи.
Элементы синхронизаторов I, II и IV (на первичном валу) передач разбираются аналогично синхронизатору III передачи.
Для снятия подшипника первичного вала съемником разжимаем стопорное кольцо…
…и снимаем его вместе с пружинной шайбой
Оперев подшипник на жесткое основание, молотком через выколотку из мягкого металла выбиваем первичный вал.
Для снятия рычага переключения передач с задней крышки картера коробки передач отсоединяем от рычага возвратную пружину
Ключом «на 10» отворачиваем три гайки крепления шаровой опоры рычага и.
..
…снимаем рычаг со шпилек.
Для замены манжеты первичного (ведущего) вала выбиваем выколоткой манжету через отверстие в передней крышке коробки передач и…
…снимаем ее
Перед осмотром детали коробки передач тщательно очистите. Щеткой или скребком удалите все отложения и очистите отверстия и шлицы от возможных загрязнений; затем промойте, чтобы устранить и растворить все остатки масла.
Обдуйте детали струей сжатого воздуха и аккуратно протрите их. Особенно тщательно продуйте подшипники, направляя струю сжатого воздуха так, чтобы не возникало быстрого вращения колец.
На зубьях шестерен и муфт не должно быть сколов, задиров, усталостных выкрашиваний и заметного износа.
Поверхности валов, осей и штоков переключения передач должны быть совершенно гладкими, без задиров, раковин и сильного износа. На картере не должно быть трещин и забоин, а в расточках под подшипники – износа и следов проворачивания.
На шлицах валов недопустимы коррозия и следы смятия и заедания.
Незначительные повреждения можно устранить мелкой шкуркой с последующей полировкой, но лучше заменить поврежденные детали новыми.
Все подшипники качения, как шариковые, так и роликовые, должны быть в безукоризненном состоянии, их радиальный люфт не должен превышать 0,05 мм, на дорожках и телах качения недопустимы любые дефекты.
Сепараторы не должны иметь разрывов, касаний колец и оплавлений (у пластмассовых).
Вообще, если «пробег» коробки превышает 120 тыс. км и производится ремонт агрегата с разборкой, все подшипники лучше заменить новыми независимо от их состояния, особенно если были замечены сильные повреждения шестерен и муфт включения передач.
Манжеты заменяем новыми в любом случае. При сборке смазываем все детали коробки, в т.ч. гнезда подшипников и сами подшипники трансмиссионным маслом, стыки картера и крышек покрываем тонким слоем маслостойкого герметика, а детали механизма переключения – смазкой ШРУС-4.
Собираем коробку передач в порядке, обратном разборке.
Пружина фиксатора штока вилки заднего хода отличается от других жесткостью, она имеет черное покрытие.
Перед установкой рабочую поверхность манжет покрываем тонким слоем смазки Литол-24. Болт зажимной шайбы подшипника промежуточного вала затягиваем моментом 8,1–10,0 кгс∙м. Гайку заднего конца вторичного вала затягиваем моментом 6,8–8,4 кгс∙м.
Ремонт КПП ВАЗ – лучшая цена. КПП ВАЗ – ремонт и диагностика с Техно-Сервис К
Обслуживание и ремонт КПП ВАЗ или автомобиля ЗАЗ — эти услуги у нас всегда доступны. Мы работаем как с зарубежными, так и с отечественными авто. Работы проводятся опытными специалистами на современном оборудовании с использованием оригинальных запчастей и комплектующих.
Любые манипуляции с коробкой переключения передач начинаем с диагностики:
- Сначала мы проводим визуальный осмотр: проверяем уровень и качество масла, рабочей жидкости, и есть ли дефекты.
- Пробный заезд — оцениваем функциональное состояние КП и каждый режим работы.
- Компьютерная диагностика. Подключаем компьютер, считывающий коды ошибок.
После тщательной проверки трансмиссии проводим ремонт КПП: цена будет разумной и в качестве не возникнет сомнений. Стоимость, варианты ремонтных работ и запчасти — все это обязательно с вами согласуем.
Ремонт КПП ВАЗ
На отечественных авто ВАЗ в основном стоят механические коробки передач, которые нуждаются в регулярном обслуживании. Если во время диагностики обнаруживаются неисправности, их нужно устранять сразу. Это недорого: на ремонт КПП ВАЗ цена невысокая, во всяком случае, намного ниже, чем покупка новой коробки передач.
Длительность ремонтных работ зависит от тяжести поломки, но мы сделаем все возможное для быстрого восстановления коробки. Для этого у нас есть многолетний опыт и необходимое оборудование.
Ремонт КПП ЗАЗ
Механическая трансмиссия ЗАЗа может выйти из строя, как по искусственным, так и по естественным причинам. Для увеличения ее эксплуатационного периода важно регулярно проходить ТО.
Если возникло подозрение на неисправность, обязательно выполните ремонт КПП ЗАЗ — услуга предоставляется недорого в «Техно-Сервис К». Первым делом мы проведем диагностику. Демонтаж и разборка коробки не всегда необходимы, но если поломка серьезная, тогда мы:
- Демонтируем узел и разберем его.
- Промоем детали и заменим масло.
- Восстановим или заменим отдельные детали.
- Выполним сборку.
- Установим и обкатаем механизм.
Все эти процедуры мы выполняем быстро. На проведенные работы предоставляем гарантию.
Ремонтировать КПП у нас — это выгодно
Почему? Мы всегда нацелены на требуемый результат. В процессе работы используем только оригинальные запчасти и применяем узкоспециализированное оборудование. Поврежденную деталь можем принять на ремонт в то время, когда будет удобно именно вам.
Мы работаем с коробками подключения передач любого типа. Проводим ремонт КПП в Симферополе — обращайтесь в любой наш дилерский центр.
Звоните и записывайтесь на сервис или просто пишите нам, и мы свяжемся с вами в течение нескольких минут.
Падение оборотов АКПП и двигателя: что делать и как исправить | Атомиум Европа
Одной из проблем, с которыми сталкиваются современные автовладельцы, является падение на оборотов двигателя при использовании АКПП . Эта неисправность заключается в внезапном кратковременном падении двигателя при переключении передач. На секунду вам может показаться, что у вас закончилось топливо. Подобная проблема обычно проявляется в автоматических коробках передач после 200000 и более километров пробега. Но есть исключения, когда могут выйти из строя даже «младшие» компоненты.
ПРИЧИНЫ ПЕРЕПАДА ОБОРОТОВ ДВИГАТЕЛЯ ПРИ ЗАМЕНЕ ПЕРЕДАЧ
Автоматическая коробка передач — это сложный технический узел, каждый компонент которого выполняет свою определенную функцию. Состояние трансмиссии в целом зависит от функциональной точности каждого узла. Падение оборотов двигателя при переключении автоматической коробки передач может быть вызвано многими причинами, которые могут быть связаны или не связаны с самой коробкой передач.
Чтобы выяснить точную причину падения оборотов двигателя при переключении передач на автомобиле ВАЗ или любом другом автомобиле требуется профессиональная диагностическая процедура.Эта процедура выполняется в мастерских, специализирующихся на ремонте автоматических коробок передач. Еще лучше, если в мастерской есть штатный специалист, специализирующийся на автоматических коробках передач вашего типа (т. Е. Марки). Любые попытки отремонтировать трансмиссию самостоятельно могут только усугубить ситуацию.
ЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ НЕИСПРАВНОСТЬ
В некоторых случаях падение оборотов двигателя при переключении на вторую или третью передачу связано с электрическими проблемами. Неисправность может быть вызвана плохим контактом или обрывом провода.В этом случае сигнал электронного блока управления (ЭБУ) не достигает коробки передач. Также может быть неисправен один из проводов свечи зажигания.
Если проблема в проводах соленоида, то падение оборотов двигателя при переключении АКПП объясняется отклонениями от режима жидкостного движения.
Сцепления или другие компоненты коробки передач могут быть повреждены. Для смягчения негативных последствий неисправности рекомендуется заменить трансмиссионное масло и добавить в него триботехнический состав AT фирмы Atomium.Компаунд устраняет небольшие поверхностные повреждения муфт и планетарных шестерен и улучшает характеристики пар трения.
НЕПРАВИЛЬНАЯ ПРОГРАММА
Возьмем для примера российские автомобили. Иногда падение оборотов двигателя при переключении АКПП связано с прошивкой ЭБУ. Эта неисправность часто встречается на автомобилях ВАЗ с прошивкой I203EK34, A203EK34, (Lada 2111 с 8-клапанным двигателем 1500 см3), I205DO54 A205DO54, A205DO57 (Lada 2112 с 16-клапанным двигателем 1600 см3).
Регулировка настроек бортового компьютера устраняет проблему. Модификация калибровки прошивки должна выполняться только опытным специалистом с опытом работы в этой области. Непрофессиональное вмешательство может принести больше вреда, чем пользы для передачи.
FAILED TPS
Падение оборотов двигателя при переключении передач часто вызвано отказом датчика положения дроссельной заслонки (TPS). При использовании конус TPS накапливает сажу, которая мешает правильному перемещению штока.При ненормальной работе ДТС топливовоздушная смесь не будет соответствовать требованиям.
Для устранения падения оборотов двигателя при переключении передач на автомобилях ВАЗ и других автомобилях очистите дроссельную заслонку. Если это не дало ожидаемого эффекта, требуется замена датчика положения дроссельной заслонки.
МОДУЛЬ ЗАЖИГАНИЯ НЕ В норме
Иногда падение оборотов двигателя при переключении автоматической коробки передач вызвано неправильным углом опережения зажигания. В случае преждевременного воспламенения топливовоздушная смесь воспламеняется, когда поршень все еще движется вверх.Расширенные газы затрудняют движение поршня и всего коленчатого вала. В этой ситуации расход топлива бесполезен.
В случае отложенного зажигания воздушно-топливная смесь воспламеняется, когда поршень уже прошел ВМТ и движется вниз. Газы удаляются без какого-либо полезного эффекта.
Установить угол опережения зажигания достаточно просто. Если у вас есть опыт, вы можете попробовать сделать это самостоятельно на российской машине. Другие современные автомобили более совершенные, поэтому лучше настроить параметры в автосервисе.
FAILED FUEL PUMP
Это еще одна причина падения оборотов двигателя при переключении АКПП . Все просто. Во время переключения на повышенную передачу двигателю требуется больше топлива, но топливный насос по какой-то причине не может обеспечить необходимый расход. Недолив и переполнение одинаково плохо сказываются на ходовых качествах. В первом случае не хватает топлива; в последнем случае топливо плохо диспергируется и не полностью сгорает в цилиндре.
Распространенной проблемой, которая приводит к падению оборотов двигателя при переключении на повышенную передачу , является засорение фильтра топливного насоса.
Если очистка сетчатого фильтра не помогла устранить падение оборотов, замените топливный насос.
ДЕФЕКТЫ БЛОКА УПРАВЛЕНИЯ ТОПЛИВОМ (FMU)
Если FMU находится в неисправном состоянии, падение оборотов двигателя при переключении передач вызвано в основном теми же причинами, что и отказавший топливный насос. Повышенная нагрузка требует большего количества топлива, но вышедший из строя FMU не может обеспечить необходимое давление в форсунках.
В FMU часто выходит из строя мембрана. Вы можете обнаружить это визуально, так как на FMU будут утечки топлива.Если целостность мембраны нарушена, падение оборотов двигателя на при переключении автоматической коробки передач определенно будет проблемой. В этом случае замените мембрану или FMU в сборе.
ЗАГРУЗКА КАНАЛА ГИДРАВЛИЧЕСКОГО БЛОКА
Эта неисправность приводит к задержке переключения передач. Некоторое время коробка передач работает одновременно на двух передачах, что вызывает падение оборотов двигателя при переключении АКПП.
В этом случае очистите гидроагрегат и проверьте соленоиды.
Если дело не слишком тяжелое, вы исправите его с небольшими потерями. Заменить жидкость ATF и добавить в нее триботехнический состав AT фирмы Atomium. Замена масла поможет удалить грязь из каналов «гидравлического мозга»; а состав на основе наночастиц оптимизирует работу масляного насоса, а также пар трения и трения.
ВМЕСТО ЗАКЛЮЧЕНИЯ
В таблице перечислены наиболее частые причины и способы устранения падения оборотов двигателя при переключении автоматической коробки передач .Некоторые процедуры можно выполнять только в мастерских. Они требуют навыков и специального оборудования.
ПРИЧИНЫ ПЕРЕПАДА ОБОРОТОВ ДВИГАТЕЛЯ | СПОСОБЫ УСТРАНЕНИЯ |
| Замените провода, замените масло и добавьте компаунд ATOMI. |
Обрыв проводов свечей зажигания | Заменить провода, проверить свечи зажигания, при необходимости заменить. |
Ошибки в прошивке ЭБУ | Откалибруйте настройки бортового компьютера в мастерской. |
Failed TPS | Очистите дроссельную заслонку; при необходимости замените датчик положения дроссельной заслонки. |
Неправильная регулировка модуля зажигания | Установите зажигание в пределах от -1 до +1 градуса, чтобы получить оптимальную работу автоматической коробки передач. |
Отказ топливного насоса или FMU | Замените топливный насос или FMU. |
Засорение канала гидравлического блока | |
Некачественное топливо | |
повреждать.
Добавьте в ATF компаунд ATF от Atomium, чтобы уменьшить возможное повреждение коробки передач.ВАЗ-2114, КПП: устройство и ремонт
На автомобилях ВАЗ-2114 система трансмиссии устроена довольно просто. Серия «Лада-Самара» — это переднеприводный автомобиль. На ведущих колесах — сцепление ВАЗ-2114, коробка передач и приводной механизм. Система сцепления понятна всем. Но конструкция коробки передач понятна далеко не всем. Посмотрим, что такое КПП, какие бывают поломки, как его обслуживать и ремонтировать.
Устройство КПП ВАЗ-2114
Чтобы двигатель мог работать в оптимальных режимах при движении в различных условиях, автомобили комплектуются коробками передач.Этот механизм способен изменять величину крутящего момента, который передается от силового агрегата на ведущие колеса в момент трогания с места или в момент набора скорости. Механизм состоит из нескольких основных элементов. Это набор вращающихся валов и шестерен раздаточных звеньев.
Корпус механизма включает кожух сцепления, картер коробки передач, заднюю крышку. Внутри механизма находится основная пара. Есть дифференциал и шестерни, за счет которых меняются передаточные числа. В этой машине использовался немного доработанный механизм, который остался с ВАЗ-2108.Разница в другой основной паре.
В КПП — это главная передача или главная, первичный вал. Он предназначен для снижения оборотов двигателя. Главная передача позволяет уменьшить количество оборотов в пропорции от 1 к 4. Таким образом, если частота вращения двигателя составляет 2 тысячи, то частота вращения главной пары будет 500 об.
У ВАЗ-2114 коробка передач в главной паре имеет стандартный показатель 3,7. Этот показатель стабильный. Но если его поменять, можно скорректировать динамические характеристики автомобиля.
Максимальный размер зависит от размера основной пары скорости и возможностей разгона. Именно этот элемент влияет на длину передачи. Если поменять главную пару, можно отрегулировать длину всех шестерен.
Также меняются ускорение и максимальная скорость.
У ВАЗ-2109 главная пара 3,9. Из-за этого максимальная скорость на этой машине ниже, но машина становится лучше.
Трансмиссия ВАЗ-2114 — пятиступенчатая механическая синхронизированная коробка передач. Главная передача связана с дифференциальным узлом.Шестерни с первой по четвертую выполнены в виде блока и посажены на первичный вал коробки. Посажен пятый блок ведущих шестерен. На ВАЗ-2114 трансмиссия также имеет вторичный вал. Оснащен ведомыми шестернями. Сам вал соединен с ведущей шестерней посредством главной пары.
Передаточные числа
Вторая, не менее важная составляющая этой коробки — передаточные числа. Это шестерни, каждая из которых отвечает за конкретную трансмиссию.Какое передаточное число на автомобилях ВАЗ-2114? Ниже приведены характеристики каждой скорости:
- Первая передача — 3 636.
- Второй — 1,95.
- Третий — 1,357.
- Четвертый — 0,941.
- Пятый — 0,784.
- Задняя передача 3,53.
Стоит учесть, что стандартный диапазон трансмиссии далек от идеала. Первая передача слишком короткая, вторая очень длинная. Из-за этого водители могут наблюдать динамический сбой, если резко переключиться с первой передачи на вторую.
И даже больше — помимо отказа при резком переключении износ синхронизаторов. Посмотрите, как выглядит коробка на ВАЗ-2114 — фото есть в нашей статье.
Кулис
КПП также оборудован турникетом.
Это особый механизм, с помощью которого драйвер переключается с одной передачи на другую. Конструкция крыльев была разработана еще в 80-х годах, поэтому имеет множество различных недостатков. Большинство водителей винят ее в низкой информативности при переключении.Передачи не всегда включаются с первого раза. Кулис заедает, либо не работает передача.
От того, как долго детализация зависит скорость переключения. Например, у спорткаров укорачивают крылья. Это дает возможность решить массу проблем с переключением и добавляет динамики.
В целях повышения информативности и управляемости крылья давно заменили тросиком. С ним КПП работает четче. Вы легко сможете включить необходимое снаряжение.
Также блок управления приводом снабжен рычагом переключения тяги и шарикоподшипниками, тягой для выбора нужной передачи, механизмом выбора скоростей.
Типичные неисправности и их симптомы
Трансмиссия ВАЗ-2114 производства АвтоВАЗ имеет достаточно высокий ресурс. Но иногда некоторые компоненты механизма могут выйти из строя. Рассмотрим типичные неисправности и их симптомы. Так же узнаем, как делается ремонт.
Передача вылетает при включении питания и не фиксируется
Причина этой проблемы в изношенных зубчатых передачах и муфтах. Это часто случается, если водитель пытается переключить передачи, не соблюдая ограничения скорости.Чтобы устранить эту неприятность, необходимо заменить поврежденные и изношенные детали. Если шестерни включаются сами по себе, то причина в износе, расслоении или трещинах на резиновой части задней опоры.
Передачи включены с усилием
В этом случае специалисты уверены, что ослабились зубцы крепления к петле.
Также возможна деформация или повреждение упора. Дело может быть в трещинах пластиковых деталей в приводе коробки передач.
Шум в нейтральной трансмиссии
Если коробка передач автомобиля ВАЗ-2114 издает много шума в нейтральной трансмиссии, это свидетельствует о низком уровне масла в коробке передач, а также о качестве заливаемого масла. Кроме того, подобный симптом наблюдается при сильном износе верхнего подшипника, который находится на первичном валу. Для устранения этой неисправности потребуется провести диагностику подшипника, а также долить уровень масла.
Хруст и треск при переключении
При переключении водитель услышит хруст при износе синхронизаторов коробки передач.
Если проигнорировать начало этого процесса, то при дальнейшей эксплуатации необходимо будет заменить не только поврежденный синхронизатор, но и редуктор полностью.
Если есть трещина в момент переключения, то это указывает на износ запорного кольца одного из синхронизаторов или осей спутников. Срочно провести диагностику.
Шум при движении на передачах
Если трансмиссия шумит при движении, то причин может быть несколько.Эта проблема заключается в износе как верхнего, так и нижнего подшипников. Помимо шума есть проблемы с заклиниванием рычага переключения передач. В этом случае необходима диагностика. При разборке КПП на ВАЗ-2114 коробка предохранителей находится под капотом. Он находится в специальном блоке.
Хорошее масло — надежная работа коробки передач
Какой бы простой и неприхотливой ни была коробка передач ВАЗ-2114, масло для нее следует подбирать только качественное. Специалисты считают, что наиболее оптимальным вариантом является минеральная трансмиссионная смазка.Также можно использовать синтетические продукты. В случае использования синтетического масла необходима периодическая очистка сальникового уплотнения коробки.
Оборудование категории GL-4 подходит для боксов серии «Самара-2». Чтобы трансмиссия была максимально надежной и безотказной, необходимо постоянно проверять уровень масла.
Самый простой способ — использовать щуп.
Заключение
Коробка передач — сложный механизм, требующий правильного обслуживания. Тогда трансмиссия прослужит владельцу весь срок службы.
p>границ | Роль p97 / VCP (Cdc48) в стабильности генома
Введение
Стабильность генома является предпосылкой для выживания клеток, предотвращения рака и контроля старения (Папамичос-Хронакис и Петерсон, 2013). Геном постоянно подвергается атаке различных активных форм кислорода из эндогенных источников. В дополнение к эндогенным источникам повреждения ДНК также могут быть вызваны различными экзогенными источниками, такими как ионизирующее излучение (ИК), ультрафиолетовый свет (УФ) и многие химические вещества, некоторые из которых являются продуктами нашего индустриального общества.
Подсчитано, что в геноме млекопитающих ежедневно накапливаются тысячи повреждений ДНК, которые нарушают синтез ДНК и деление клеток, два важных процесса амплификации, сохранения и перехода генома к следующему поколению (Jackson and Bartek, 2009). Неспособность поддерживать стабильность генома приводит к хромосомным аберрациям, генным мутациям и раку или гибели клеток. Для поддержания стабильности генома клетки реагируют на повреждение ДНК, активируя пространственно-временной сигнальный путь, известный как ответ на повреждение ДНК (DDR; Ciccia and Elledge, 2010).После повреждения ДНК DDR управляет контрольными точками клеточного цикла и инициирует репарацию ДНК или вызывает апоптоз, если геном серьезно поврежден. Хотя DDR после двухцепочечного разрыва (DSB) широко исследуется и считается моделью DDR, другие типы повреждений ДНК могут вызывать активацию DDR, специфичных для поражения, которые сигнализируют и привлекают соответствующие сенсорные, трансдукторные и эффекторные белки (Джексон и Бартек, 2009).
Например, нерепарированные повреждения ДНК, которые переходят в S-фазу, сталкиваются с серьезной проблемой во время репликации ДНК.Когда вилка репликации ДНК приближается к этим очагам поражения, клетка активирует путь устойчивости к повреждению ДНК (DDT), что делает возможным выживание за счет активации пути синтеза трансфузионной ДНК (TLS) (Friedberg, 2005). Путь TLS позволяет привлекать трансфузионные ДНК-полимеразы (ДНК-полимеразы), которые могут обходить объемные повреждения ДНК и обеспечивать непрерывный синтез ДНК. Активация специфичного для поражения DDR и соответствующих механизмов репарации ДНК или DDT обеспечивает выживание клеток и предотвращает геномную нестабильность и рак.DDR и DDT контролируются различными посттрансляционными модификациями (PTM), в которых убиквитинирование и сумоилирование играют существенную роль (Bergink and Jentsch, 2009; Al-Hakim et al., 2010; Ulrich and Walden, 2010; Bekker-Jensen and Mailand). , 2011; Lehmann, 2011b; Psakhye, Jentsch, 2012). Убиквитинирование и сумоилирование регулируют своевременную сборку и разборку различных молекул, отвечающих за репарацию ДНК и геномных структур.
Нарушения этой жесткой регуляции могут вызвать серьезные дефекты DDR и привести к геномной нестабильности, что было продемонстрировано при определенных типах рака груди и яичников, а также у пациентов с синдромом RIDDLE (Blundred and Stewart, 2011; Lipkowitz and Weissman, 2011).Мутации в BRCA1, убиквитинлигазе E3, участвующей в DDR, могут привести к раку груди и яичников, в то время как мутации в связанной с DDR лигазе E3 RNF168 могут вызвать синдром RIDDLE, который характеризуется гиперчувствительностью к радиации, иммунодефицитом, дисморфизмом и трудностями в обучении. . Поскольку многие белки DDR, связанные с хроматином, прочно связаны с участками повреждения ДНК и часто защищены от деградации, пространственно-временному обороту и деградации способствует система убиквитин-протеасома (UPS; Dianov, 2011; Levy-Barda et al., 2011; Рамадан и Миранг, 2011 г.). До сих пор неизвестно, как UPS и его самый большой компонент, протеасома, приближаются, удаляют и разрушают прочно связанные белковые комплексы на хроматине.
Открытие функции p97, связанной с хроматином, может дать ответ (Dantuma and Hoppe, 2012; Ramadan, 2012).
В последние годы убиквитин-зависимый молекулярный шаперон p97 стал важным регулятором UPS-зависимого белкового обмена в хроматине. p97, также известный как валозин-содержащий белок (VCP) или Cdc48, является центральным элементом UPS и интегрируется после убиквитинирования субстрата и выше протеасомы.Обладая присущей АТФазной активностью, p97 извлекает (отделяет) полиубиквитинированные белки из различных участков клетки и представляет их для протеасомной деградации. p97 также участвует в деградации сильно свернутых убиквитинированных растворимых протеасомных субстратов и, таким образом, функционирует как развертка (Beskow et al., 2009). Недавно выясненные функции p97 в нескольких метаболических процессах ДНК указывают на то, что белок является составным компонентом различных важных процессов, связанных с хроматином, в клеточном цикле, репликации и репарации ДНК, митозе и транскрипции.
Однако функция p97 в отношении стабильности генома еще не изучена.
В этом обзоре мы обсуждаем различные функции p97 в связанных с хроматином процессах, важных для поддержания стабильности генома, и пытаемся установить p97 в качестве хранителя генома. Мы также представляем большое количество доказательств того, что индуцированный белками стресс хроматина (PICHROS) вызывает генотоксический стресс, что в конечном итоге приводит к нестабильности генома.
Убиквитин-зависимый молекулярный шаперон p97
Молекулярный шаперон p97, также известный как VCP у позвоночных, Cdc48 в S.cerevisiae , Cdc-48 в C. elegans , TER94 в Drosophila и VAT в архебактериях, является членом класса II АТФазы, связанной с различными АТФазами клеточной активности (ААА) (Woodman, 2003; Halawani and Latterich, 2006; Jentsch, Rumpf, 2007; Stolz et al., 2011; Meyer et al., 2012; Verma et al., 2013). p97 является высококонсервативным от архебактерий до человека и является одним из наиболее распространенных белков цитоплазмы и нуклеоплазмы (Peters et al.
, 1990). Это гомогексамерный бочкообразный молекулярный механизм, состоящий из следующих доменов: N-концевой, двух кассет АТФазы (D1 и D2) и C-концевого домена (рис. 1A).N-концевая область p97 связывает множество субстратов, в основном встроенных в различные клеточные структуры, такие как эндоплазматический ретикулум (ER), рибосомы, мембранные везикулы, веретена или хромосомы. После связывания с субстратом p97 использует гидролиз АТФ в домене D2 для стимуляции основных внутренних конформационных изменений, которые передаются по всей молекуле p97 в N-концевой домен (Rouiller et al., 2002; Li et al., 2012 ). Внутренние конформационные изменения позволяют p97 ремоделировать и, таким образом, извлекать (активность сегрегазы) связанные субстраты из различных клеточных структур или белковых комплексов.Помимо своей сегрегазной активности в различных клеточных структурах, p97 служит развёртыванием при процессинге сильно свернутых растворимых субстратов протеасом (Beskow et al., 2009). Большинство субстратов p97 убиквитинировано, и убиквитин служит основным регулятором функции p97 (Ye, 2006).
Идентификация Ufd1 , одного из основных адаптеров p97, и Ufd2 , p97-ассоциированной E4-убиквитинлигазы, в качестве основных дрожжевых генов при деградации растворимого субстрата путем расщепления слияния убиквитина (UFD) было первым сообщением о p97. / Cdc48 в ИБП (Johnson et al., 1995). p97 действует как сегрегаза или молекулярный штопор для убиквитинированных субстратов. Подобно убиквитину и UPS, p97 участвует в различных, не связанных между собой клеточных функциях и путях. Интересно, что специфичность p97 в различных путях и субстратах регулируется разными адапторными белками p97 (также известными как кофакторы p97), которые обычно обладают убиквитин-связывающими доменами (Yeung et al., 2008; Hanzelmann et al., 2011; Kloppsteck et al. ., 2012). В общем, адаптеры p97 — это только те белки с взаимодействующими с p97 доменами или мотивами, как UBX (убиквитин регуляторный X) домен, UBD (убиквитин D) домен, PUB [PNGase (пептид N -гликозидаза) / убиквитин-связанный ], мотив SHP, мотив VIP (VCP-взаимодействующий белок) или VBM (VCP-связывающий мотив).
UBX является наиболее заметным взаимодействующим доменом p97 и имеет структуру, аналогичную убиквитину, но не имеет гомологии последовательностей. В клетках млекопитающих имеется по крайней мере 13 различных белков, содержащих домен UBX (белки UBX), и их функции в значительной степени не охарактеризованы. Недавно было показано, что все белки UBX взаимодействуют с p97 в качестве основных регуляторов функции p97 (Alexandru et al., 2008). Неизвестно, сколько различных адаптерных комплексов p97 существует в клетке, но текущее понимание p97 и его адаптеров предполагает существование следующих трех основных взаимоисключающих основных адаптерных комплексов p97: p97 – Ufd1 – Npl4 (p97 –Udf1 –Npl4 ), p97 – p47 (p97 –p47 ) и p97 – UBXD1 (p97 –UBXD1; Meyer et al., 2012; Рисунок 1B). Каждый из адаптерных комплексов p97 предназначен для определенного убиквитин-зависимого клеточного процесса. Согласно «гипотезе стержневого адаптера p97», комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 участвует в регуляции в основном полиубиквитинированных субстратов Lys48 и протеасомной деградации в различных клеточных процессах, таких как ER-ассоциированная деградация (ERAD), хроматин- ассоциированная деградация белка (CAD) или ассоциированная с рибосомами деградация (RAD).
Напротив, коровые комплексы p97 p97 –p47 и p97 –UBXD1 участвуют в ubiquitin-зависимом протеасомно-независимом мембранном слиянии и процессах везикулярного транспорта.Специфичность и активность ядерных адаптерных комплексов p97 по отношению к разным субстратам зависит от комбинации вторичных адаптеров p97 в процессе, известном как иерархия адаптеров p97 (Hanzelmann et al., 2011). Это лучше всего иллюстрируется комплексом p97 –Npl4 –Ufd1 , который обрабатывает и ремоделирует различные полиубиквитинированные субстраты, участвующие в различных путях одной и той же клеточной структуры, например хроматин (Alexandru et al., 2008; Verma et al., 2011; Davis et al., 2012; Mosbech et al., 2012). Например, коровой комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 (i) рекрутируется для остановки транскрипции с помощью UBX4 и UBX5 (человеческие гомологи UBXD9 и UBXD7) и извлекает РНК pol II из хроматина или (ii) рекрутируется для остановки репликации ДНК.
ассоциированным с повреждением ДНК кофактором 1 VCP / p97 (DVC1; также известный как SPARTAN или C1orf124) и извлекает ДНК pol delta и eta (Davis et al., 2012; Ghosal et al., 2012; Mosbech et al., 2012) или (iii) связывает растворимый индуцируемый гипоксией фактор 1a посредством UBXD7 (Alexandru et al., 2008). Все белки, экстрагированные, реконструированные или развернутые из-за активности сегрегазы p97 и / или развёртывания, в конечном итоге разрушаются протеасомой.
РИСУНОК 1. p97 и его три основных адаптера регулируют различные клеточные функции. (A) Доменная структура мономера p97: N-концевой участок (желтый), линкерные участки L1 и L2 (серый), две кассеты АТФазы D1 и D2 (зеленый) и С-концевой хвост (синий). (B) Гомогексамер p97 образует бочкообразную структуру, которая взаимно связывает один из трех основных адаптерных комплексов, гетеродимер Npl4-Ufd1, UBXD1 или p47, и регулирует различные клеточные функции, как указано в белых прямоугольниках.
ERAD, деградация, связанная с эндоплазматическим ретикулумом; RAD, деградация, связанная с рибосомами; CAD, деградация, связанная с хроматином.
В дополнение к его функции в UPS, в последние несколько лет функция p97 появилась в поддержании клеточного гомеостаза, регулируя два тесно связанных процесса, аутофагию и эндосомный перенос (Ju et al., 2009; Tresse et al., 2010; Ritz и др., 2011). p97 играет важную роль в созревании аутофагосом, покрывающих убиквитин, подтверждая его функцию в аутофагической деградации убиквитиновых субстратов.Основное внимание в этом обзоре уделяется функции p97 в CAD и стабильности генома. Подробнее о функции p97 в аутофагии и эндосомном трафике см. В другом месте (Ju and Weihl, 2010b; Bug and Meyer, 2012).
Связанная с хроматином деградация белка и индуцированный белком стресс хроматина
Хроматин представляет собой большую платформу интеграции белков, в которой структурные, динамические и пространственно-временные ассоциации с белками, участвующими в различных процессах, таких как транскрипция, репликация ДНК, репарация ДНК и деление клеток, должны строго регулироваться.
Почти каждый белок, задействованный в хроматине во время этих процессов, которые необходимы для поддержания генома, требует своевременного удаления или разборки. Различные компоненты UPS и протеасомы тесно связаны с хроматином, особенно когда требуется повышенная скорость оборота белка, как в случаях повреждения ДНК (Levy-Barda et al., 2011; Ramadan and Meerang, 2011; Butler et al., 2012). ИБС играет важную роль в поддержании целостности генома и клеточного гомеостаза (рис. 2). Хотя хроматин является ключевым участком белкового обмена, необходимого для стабильности генома, CAD недавно стала важным компонентом метаболизма хроматина (Acs et al., 2011; Леви-Барда и др., 2011; Meerang et al., 2011; Фэн и Чен, 2012; Галанты и др., 2012; Gudjonsson et al., 2012; Маллетт и др., 2012; Mattiroli et al., 2012; Рамадан, 2012 г .; Инь и др., 2012). Многие белки, действующие на хроматин, прочно связаны со структурой хроматина или связанными с хроматином процессами и даже считаются нерастворимыми. Помимо физического присутствия протеасом в непосредственной близости от хроматина, требуется механическое усилие для ремоделирования и разборки связанных с хроматином субстратов для окончательного удаления и деградации.
Открытие убиквитин-зависимой молекулярной сегрегазы p97 как неотъемлемой части CAD проливает новый свет на то, как клетки разбирают белки из хроматина (Ramadan, 2012). Инактивация p97 РНКи или мутантами сегрегазы p97 в различных системах (например, дрожжи и человек) вызывает накопление K48-полиубиквитинированных субстратов p97 на хроматине, что приводит к PICHROS. PICHROS отрицательно влияет на последующие события, которые включают накопленные субстраты, такие как репликация ДНК, репарация ДНК, митоз и транскрипция (рисунок 3; Ramadan et al., 2007; Franz et al., 2011; Meerang et al., 2011; Raman et al., 2011; Верма и др., 2011). Насколько нам известно, первым идентифицированным ассоциированным с хроматином субстратом p97 был Aurora B (Ramadan et al., 2007). После этого открытия информация об удалении субстратов хроматина за счет убиквитин-зависимой активности p97 быстро прогрессировала (Wilcox and Laney, 2009; Acs et al., 2011; Franz et al., 2011; Meerang et al., 2011; Raman et al. ., 2011; Davis et al.
, 2012; Ghosal et al., 2012; Mosbech et al., 2012).Важность функции CAD в стабильности генома была дополнительно подтверждена открытием K48 убиквитинированных субстратов, управляемых E3 ubiquitin ligase RNF8 и p97 в сайтах повреждения ДНК (Meerang et al., 2011). Понимание функции CAD в стабильности генома быстро прогрессирует (см. Выше). Тесное сотрудничество между убиквитинированием и сумоилированием в местах повреждения ДНК играет роль в ИБС. Эволюционно консервативная SUMO-нацеленная убиквитинлигаза E3 (STUbL) RNF4 у млекопитающих, Slx5-Slx8 в почкующихся дрожжах и Rfp1 / 2-Slx8 в делящихся дрожжах рекрутируется на сумоилированные субстраты в местах повреждения ДНК (Prudden et al., 2007; Галанты и др., 2012; Инь и др., 2012). STUbL полиубиквитинирует SUMO-модифицированные белки и готовит их к протеасомной деградации. Инактивация STUbL вызывает гипераккумуляцию конъюгатов SUMO и индуцированную SUMO клеточную токсичность. В линиях клеток человека RNF4 рекрутируется на сумоилированные субстраты и полиубиквитинирует DSB-индуцированные факторы, такие как медиатор контрольной точки повреждения ДНК 1 (MDC1) и фактор репликации A (RPA).
Следовательно, полиубиквитинированные MDC1 и RPA удаляются из участков повреждения протеасомозависимым образом (Shi et al., 2008; Галанты и др., 2012). RNF4-зависимый оборот MDC1 и RPA позволяет рекрутировать нижестоящие факторы, такие как BRCA2 и Rad51, необходимые для эффективной репарации ДНК. Инактивация RNF4 также вызывает сохранение других факторов в местах повреждения, таких как E3 ubiquitin ligases RNF8 и RNF168 и сигнальный фактор повреждения ДНК 53BP1 (Yin et al., 2012). Две дополнительные E3 ubiquitin ligases, UBR5 и TRIP12, участвуют в CAD и защите от PICHROS (Gudjonsson et al., 2012). UBR5 и TRIP12 регулируют оборот RNF168, первичной убиквитинлигазы E3, которая убиквитинирует гистоны после DSB.Истощение UBR5 и TRIP12 вызывает гипераккумуляцию RNF168 и значительное увеличение конъюгатов убиквитина, что стимулирует повсеместное накопление убиквитин-зависимых факторов 53BP1 и BRCA1. Нарушение регуляции пространственно-временного обмена белков, зависящих от SUMO и убиквитина, может вызывать гипераккумуляцию различных белков на хроматине, что, как следствие, приводит к PICHROS и нестабильности генома.
В следующем тексте мы сосредоточимся на p97-зависимой CAD и PICHROS, непосредственно связанных со стабильностью генома.Мы также подробно рассмотрим функцию p97 в клеточном цикле, которая может косвенно влиять на стабильность генома.
РИСУНОК 2. Расщепление хроматина-ассоциированного белка (CAD), регулируемое p97 –Ufd1 –Npl4 . Связанные с хроматином белки (S представляет собой любой известный субстрат p97 на хроматине) полиубиквитинируются и сумоилируются специфическими E3-убиквитином и лигазами SUMO. Комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 рекрутируется на полиубиквитинированные субстраты с помощью убиквитин-связывающего домена в Npl4 или Ufd1.Гидролиз АТФ, расположенный в кассете АТФазы D2, вызывает конформационные изменения в молекуле p97 для ремоделирования и высвобождения связанных с хроматином субстратов. Извлеченные субстраты либо разлагаются протеасомами, либо перерабатываются. Комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 поддерживает CAD и предотвращает PICHROS.
РИСУНОК 3. Белок-индуцированный хроматиновый стресс (PICHROS). Как показано на фиг. 2, связанные с хроматином субстраты полиубиквитинированы, но не могут быть удалены из-за инактивации p97.Накопление полиубиквитинированных субстратов на хроматине вызывает PICHROS, который серьезно нарушает, в основном ингибирует, важные метаболические процессы ДНК, такие как репликация ДНК, транскрипция или репарация ДНК, и приводит к нестабильности генома.
p97 в клеточном цикле
Прогрессирование клеточного цикла можно упростить до двух основных процессов: репликации ДНК (S-фаза) и сегрегации реплицированных хромосом в две дочерние клетки (M-фаза). Фазы G1 и G2 интеркалируются, чтобы обеспечить выполнение всех требований, необходимых для безопасной репликации и сегрегации ДНК.Переход от одной фазы клеточного цикла к другой контролируется многочисленными механизмами, обеспечивающими правильное деление клеток. Циклинзависимые киназы (CDK) играют центральную роль в развитии клеточного цикла.
Активность CDKs координируется транскрипцией и убиквитин-зависимой деградацией различных циклинов, специфичных для клеточного цикла, ингибиторов CDK и фосфатаз (Malumbres and Barbacid, 2009). Кроме того, механизмы контрольных точек, активируемые при повреждении ДНК, обеспечивают качество ДНК во время репликации и сегрегации (Branzei and Foiani, 2009).
Ген Cdc48 (гомолог p97) был идентифицирован в ходе первого генетического скрининга мутантов цикла клеточного деления (cdc) у дрожжей (Moir et al., 1982). Cdc48 обычно прикрепляется к ER, но перемещается в ядро после фосфорилирования зависимым от клеточного цикла способом (Madeo et al., 1998). Несколько наблюдений на дрожжах и других организмах показали, что Cdc48 имеет решающее значение для нормального развития клеточного цикла и связанной с ним стабильности генома (Mouysset et al., 2008; Deichsel et al., 2009). У дрожжей мутации в гене Cdc48 вызывают задержку перехода G1 / S и задержку G2 / M. У эмбрионов C.
elegans истощение Cdc-48 или одного из его кофакторов, Ufd-1 или Npl-4, вызывает задержки в прогрессии S фазы из-за активации контрольных точек репликации (Mouysset et al., 2008). Инактивация p97 или Ufd1 – Npl4 также приводит к замедленному прохождению через анафазу и выходу из митоза в линиях клеток человека и экстрактах яиц Xenopus (Ramadan et al., 2007; Dobrynin et al., 2011). Эти p97-дефектные фенотипы ясно демонстрируют критическую функцию p97 в разных фазах клеточного цикла. p97 важен для деградации белка, а для развития клеточного цикла требуется удаление / деградация белков, связанных с клеточным циклом. Определение роли p97 в регуляции этих процессов важно для понимания того, как рецикл / деградация белка влияет на нормальный клеточный цикл.
p97 в переходе G1 / S
Многие решения о судьбе клетки определяются в фазе G1 клеточного цикла.Ключевой вопрос — размножаться (воспроизводиться) или нет. Когда клеточная среда благоприятна, клетки инициируют цикл деления.
Клеточная приверженность репликации генома и делению известна как точка ограничения. После прохождения точки рестрикции клетки переключаются с митоген-зависимого роста в ранней стадии G1 на независимую от фактора роста прогрессию в S-фазе, которая контролируется белком ретинобластомы (pRb) и комплексом cdk4 / циклин D. Cdk4 / циклин D гиперфосфорилирует pRb, что, следовательно, высвобождает факторы транскрипции E2F, которые активируют транскрипцию нескольких регуляторных генов, необходимых для перехода G1 / S и прогрессирования S-фазы, таких как циклин E и циклин A.Активность cdk4 / cyclin D должна строго регулироваться (Malumbres and Barbacid, 2009).
Мутации в гене Cdc48 задерживают переход G1 / S у почкующихся дрожжей (Fu et al., 2003). Cdc28 / Cln, дрожжевой Cdk1 / циклин, важный для перехода G1 / S, контролирует выполнение Start (точка фиксации клеточного цикла дрожжей, эквивалентная точке рестрикции в клетках млекопитающих). Far1p является ингибитором Cdc28 / Cln, и его деградация необходима для прогрессирования G1 / S.
Cdc48 физически взаимодействует с убиквитинированным Far1p и стимулирует его деградацию.Было показано, что дефект в переходе G1 / S после инактивации Cdc48 обусловлен персистенцией ингибитора Cdc28 / Cln Far1p. В отличие от нормальных клеток, в которых Far1p разрушается после высвобождения из G1 ареста, мутантные клетки Cdc48 и накапливают убиквитинированный Far1p. Задержка G1 / S может быть устранена после мутаций в генах Cdc48 и Far1p , что ясно указывает на то, что Cdc48 необходим для деградации Far1p. Хотя данные отсутствуют, подобный p97-зависимый процесс может существовать у высших эукариот, у которых активность CDK также регулируется ингибиторами CDK.Помимо деградации Far1p, комплекс Cdc48 –Ufd1 –Npl4 контролирует переход G1 / S посредством механизмов путей целостности клеточной стенки у дрожжей (Hsieh and Chen, 2011). Механизмы, с помощью которых Cdc48 контролирует целостность клеточной стенки, не определены, хотя Cdc48, по-видимому, регулирует активность Mpk1, которая является членом семейства киназ MAP, важным для целостности клеточной стенки, в ответ на стрессовые условия, включая тепловой шок.
p97 в репликации ДНК и S-фазе
Чтобы разделить и сохранить неповрежденный геном, клетки должны жестко регулировать репликацию ДНК.Синтез ДНК происходит в S-фазе, но подготовка начинается в позднем митозе и G1, загружая пререпликативный комплекс (pre-RC) в каждой точке начала репликации. Некоторые предварительные RC активны, в то время как другие остаются бездействующими. Пре-RC состоят из комплекса распознавания ориджина (ORC), белка контроля клеточного деления (Cdc6), фактора лицензирования и репликации хроматина (Cdt1) и геликазного комплекса поддержания минихромосомы (MCM). Пре-RC активируется фосфорилированием, чтобы задействовать важные факторы репликации, такие как MCM-10, CDC-45 и комплекс Go-Ichi-Ni-San (GINS), с образованием комплекса пре-инициации (pre-IC), который задействует ДНК-примазу и полимеразы для инициации синтеза ДНК.После срабатывания ориджинов факторы пре-RC удаляются или ингибируются, чтобы предотвратить повторную репликацию генома в течение того же клеточного цикла.
Различные препятствия во время синтеза ДНК, такие как вторичные структуры ДНК, комплексы ДНК-белок или поврежденные основания, могут остановить вилку или привести к ее разрушению. Чтобы гарантировать, что вилка репликации ДНК может справиться со всеми этими проблемами, клетки активируют контрольную точку внутри-S фазы (Branzei and Foiani, 2010).
p97 включает регуляцию репликации ДНК и ее прохождения через S-фазу (Mouysset et al., 2008). Истощение Cdc-48 (p97) или его адаптеров Ufd-1 или Npl-4 в C. elegans значительно задерживает прогрессирование через S-фазу из-за активации atl1 (ATR) и Chk1-зависимой контрольной точки внутри-S фазы. Истощение Cdc-48, Ufd-1 или Npl-4 снижает количество ядер и общее количество ДНК и увеличивает количество хромосомных мостов у эмбрионов C. elegans . Истощение киназ контрольной точки внутри-S-фазы полностью восстанавливает задержку прогрессирования S-фазы в Cdc-48-, Npl-4- или Ufd-1-дефектных клетках, но не может восстановить количество ядер, содержание ДНК или уменьшить количество хромосомных мостов.
Недавние работы двух независимых групп предоставили механистическое понимание роли p97 –Ufd1 –Npl4 в репликации ДНК (Franz et al., 2011; Raman et al., 2011). Исследовательские группы показали, что p97 регулирует оборот и стабильность хроматина Cdt1 посредством двух различных путей: (i) путь, связанный с УФ-повреждением (Raman et al., 2011) и (ii) запуск и удлинение репликационной вилки (Franz et al. , 2011). В пути, связанном с УФ-поражением, p97 регулирует разрушение Cdt1 на участках УФ-индуцированного повреждения ДНК.После повреждения ультрафиолетом аппарат эксцизионной репарации нуклеотидов (NER) распознает искаженную ДНК (димеры тимина) и вырезает поврежденные цепи ДНК длиной 25-30 нуклеотидов. Этот разрыв восстанавливается путем полимеризации ДНК в зависимых от Cul4-DDB2 способах, связанных с ядерным антигеном пролиферирующих клеток (PCNA) и убиквитинлигазой E3. Cdt1 связывается с PCNA, чтобы инициировать репликацию ДНК в местах повреждения, но должен строго регулироваться, чтобы предотвратить повторную репликацию.
После инициации синтеза ДНК связанный с PCNA Cdt1 полиубиквитинируется Cul4-DDB2, экстрагируется из хроматина p97 -Ufd1 -Npl4 -зависимым образом и представляется протеасоме для окончательной деградации (Raman et al., 2011). p97 непосредственно контролирует синтез ДНК, заполняющий пробелы, после УФ-повреждения. Во втором пути p97 контролирует репликацию ДНК путем экстракции полиубиквитинированного Cdt1 из хроматина в физиологических условиях в экстракте яиц C. elegans и Xenopus . Инактивация комплекса p97 –Ufd1 –Npl4 стабилизирует Cdt1 на интерфазном и митотическом хроматине. Следовательно, Cdc45 и GINS стабилизируются на связанном с хроматином Cdt1 и могут мешать удлинению вилки репликации ДНК (Franz et al., 2011). Истощение Cdc-48 / p97 приводит к накоплению Cdt1 на хроматине у эмбрионов C. elegans, , яичного экстракта Xenopus и линий клеток человека. Повторная репликация, типичный фенотип, вызванный сверхэкспрессией Cdt1, не наблюдалась в клетках, истощенных по p97 / Cdc-48.
Напротив, два независимых исследования показали, что инактивация p97 вызывает задержку G2 / M в линии клеток эмбриональной почки человека (HEK293) и снижает общее содержание ДНК у C. elegans (Mouysset et al., 2008; Raman et al., 2011). Это диаметрально отличается от типичного фенотипа репликации, который включает повышенное количество общей ДНК, характеризующееся повышенными уровнями белка Cdt1 (Teer and Dutta, 2008; Ramanathan and Ye, 2011). Молекулярные механизмы, включающие регуляцию репликации ДНК p97, нельзя просто объяснить экстракцией и стабильностью Cdt1 из хроматина. Однако была продемонстрирована эволюционно консервативная функция p97 –Ufd1 –Npl4 в репликации ДНК (Mouysset et al., 2008; Deichsel et al., 2009; Franz et al., 2011; Raman et al., 2011). p97, скорее всего, регулирует несколько стадий во время синтеза ДНК. Эта гипотеза может быть дополнительно подтверждена прямыми физическими взаимодействиями с несколькими репликативными геликазами, такими как белок Вернера и HIM-6 (гомолог геликазы Блума; Partridge et al.
, 2003; Indig et al., 2004; Caruso et al., 2008). .
p97 при митозе
Митоз характеризуется глубокими изменениями в физиологии клетки, которые позволяют разобрать ядерную оболочку и разделить генетический материал на две дочерние клетки.Пространственно-временная координация сложных митотических процессов зависит от событий фосфорилирования и убиквитинирования, которые имеют решающее значение для целостности генома. В конце митоза ингибирование / деградация нескольких киназ, таких как cyclin B и Aurora B, приводит к разборке веретена, цитокинезу, деконденсации хроматина и реформированию ядерной оболочки (Carmena et al., 2012).
Aurora B был первым субстратом p97, обнаруженным в хроматине (Ramadan et al., 2007). В Xenopus яичных экстракта и C.elegans , p97 / Cdc-48 –Ufd1 –Npl4 связывает полиубиквитинированное Aurora B и извлекает его из митотического хроматина. p97-зависимое удаление Aurora B делает возможным деконденсацию хроматина и образование ядерной оболочки во время выхода из митоза.
Сходный механизм наблюдался в линиях клеток человека, хотя регуляция активности Aurora B с помощью p97 инициируется намного раньше во время митоза (Dobrynin et al., 2011). Истощение Ufd1 или Npl4 вызывает увеличение активности Aurora B, что приводит к дефектам хромосомного выравнивания в анафазе, что приводит к неправильной сегрегации хромосом и многодолевым ядрам.Эти результаты устанавливают p97 –Ufd1 –Npl4 как негативный регулятор активности Aurora B, который регулирует многоступенчатые процессы в динамике хромосом во время митоза.
Сходным образом, Cdc-48 в C. elegans , как было показано, необходим для правильной конденсации и сегрегации мейотических хромосом с помощью контроля AIR-2 / Aurora B (Sasagawa et al., 2012). Cdc-48 необходим для локализации AIR-2 в областях между гомологичными хромосомами в мейозе I. В отсутствие Cdc-48 более высокие уровни AIR-2 увеличивают фосфорилирование его субстратов по всей длине хромосом, что приводит к дефектным хромосомам.
расщепление хромосом.
В отличие от основного комплекса p97 –Ufd1 –Npl4 , который извлекает и инактивирует Aurora B в митозе, другой основной комплекс p97 (p97 –p47 ) уравновешивает активность Aurora B в митозе с использованием другого механизма (Cheng и Чен, 2010). Комплекс Cdc-48 -Shp1 (p97 -p47 у многоклеточных) способствует ядерной локализации Glc7, дрожжевого ортолога протеинфосфатазы-1 (PP1), который противодействует активности киназы Aurora B. Инактивация комплекса Cdc-48 –Shp1 вызывает остановку клеточного цикла в метафазе из-за дефекта биполярного прикрепления кинетохоры, которая активирует контрольную точку веретена.
Помимо регуляции Aurora B, Cdc48 / p97 необходим для правильной разборки веретена в конце митоза (Cao et al., 2003). Яичные экстракты Xenopus , содержащие доминантно-отрицательную форму p97 (p97QQ) или обедненные кофакторами Ufd1 или Npl4, были неспособны разобрать веретено и преобразовать межфазные микротрубочки (МТ) и оставались в митотическом состоянии.
Cdc48 / p97 –Ufd1 –Npl4 специфически взаимодействует с факторами сборки веретена XMAP215, TPX2 и Plx1 на выходе из митоза, способствуя его секвестрации в цитоплазме или экстракции из MTs.Эта функция p97 была дополнительно подтверждена в дрожжах, где p97 (Cdc48) необходим для деградации факторов сборки веретена Ase1 и Cdc5.
В заключение, два ядерных комплекса p97, p97 –Npl4 –Ufd1 и p97 –p47 , координируют активность Aurora B в хроматине, чтобы обеспечить правильное выравнивание хромосом, сегрегацию, деконденсацию и формирование ядерной оболочки на выходе из митоза. Помимо прямого воздействия на митотический хроматин, комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 также регулирует разборку веретена в конце митоза.
p97 в повреждении ДНК
Чтобы справиться с повреждением ДНК, сохранить генетическую информацию для следующего поколения и выжить, клетки развили множество механизмов восстановления ДНК, специфичных для различных типов повреждений, которые управляются DDR и DDT (Nyberg et al.
, 2002; Jackson and Бартек, 2009; Куртин, 2012). Хотя фосфорилирование p97 после ИР и физического взаимодействия с BRCA1 предсказало роль p97 в репарации ДНК более десяти лет назад, его функция в репарации ДНК оставалась загадкой (Zhang et al., 2000; Ливингстон и др., 2005). Молекулярный механизм p97 возник в репарации DSB, TLS и связанном с транскрипцией NER (TC-NER) только недавно (Acs et al., 2011; Meerang et al., 2011; Verma et al., 2011; Davis et al., 2012; Ghosal et al., 2012; Mosbech et al., 2012). Еще предстоит выяснить, участвует ли p97 в других путях репарации ДНК.
DVC1 связывает p97 с транслезионным синтезом ДНК
ДНК особенно уязвима для повреждения во время репликации ДНК. Некоторые основные аддукты могут не обнаруживаться репарационными белками до прохождения S-фазы.Во время репликации эти повреждения не могут быть размещены на активных сайтах репликативных pols ДНК и останавливают прогрессию репликационной вилки ДНК (Lehmann, 2011a). Застрявшие репликационные вилки активируют пути ДДТ и привлекают трансфузионные ДНК-pols, механизм, известный как TLS (Ulrich, 2007; Sale et al.
, 2012). TLS использует механизм переключения ДНК-pol, модулируемый статусом убиквитинирования PCNA, в котором репликативные ДНК-pols заменяются на translesion ДНК-pols (Lehmann, 2011b).
Транслезионный синтез ДНК инициируется моноубиквитинированием PCNA убиквитинлигазой E3 Rad18.Специализированные полы ДНК трансформации привлекаются к моноубиквитинированной PCNA на остановившихся вилках репликации, чтобы способствовать обходу поврежденной ДНК. Однако для репликации через участок поражения часто требуется последовательное действие двух pols ДНК, в одном из которых вставляется нуклеотид напротив повреждения (ДНК-poleta), а другой идет от вставленного нуклеотида (DNA polzeta; Lange et al., 2011). . После обхода поражения PCNA деубиквитинируется убиквитиновой протеазой USP1, которая стимулирует переключение с трансформации на репликативные полимеразы и продолжение репликации ДНК (Fox et al., 2011).
Недавно идентифицированный адаптер p97, DVC1, также известный как Spartan, недавно стал центральным фактором в TLS (Centore et al.
, 2012; Davis et al., 2012; Ghosal et al., 2012; Juhasz et al., 2012). ; Machida et al., 2012; Mosbech et al., 2012; Kim et al., 2013). DVC1 является консервативным от C. elegans для людей и локализуется в УФ-индуцированных повреждениях ДНК и других повреждениях, связанных с репликацией ДНК, но не в DSB, индуцированных ИК. Было показано, что истощенные по DVC1 клетки чувствительны к различным генотоксическим агентам, связанным с репликацией.Вместе с физическим взаимодействием и колокализацией клеток с PCNA эти находки подчеркивают роль DVC1 в процессах повреждения ДНК, связанных с репликацией, но не репарацию DSB после IR.
DVC1 содержит несколько доменов, таких как предполагаемый домен металлопротеиназы цинка (SprT), мотив, взаимодействующий с p97 (SHP), домен взаимодействия PCNA (PIP) и убиквитин-связывающий домен цинкового пальца (UBZ4), которые связывают его функцию. к убиквитин-зависимым и регулируемым p97 процессам, связанным с репликацией (Davis et al., 2012; Ghosal et al.
, 2012; Mosbech et al., 2012). Помимо взаимодействия с PCNA, DVC1 взаимодействует с другими важными белками, участвующими в репликации ДНК, TLS и UPS, такими как ДНК pol delta, eta, Rad18, убиквитин и комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 (Centore et al. al., 2012; Davis et al., 2012; Ghosal et al., 2012; Machida et al., 2012; Mosbech et al., 2012; Kim et al., 2013). Было показано, что DVC1 напрямую взаимодействует с p97 в домене SHP, который важен для рекрутирования p97 в застопорившиеся репликационные вилки.DVC1, лишенный домена SHP, может колокализоваться с повреждениями ДНК, но не может рекрутировать p97. Эти данные свидетельствуют о неоспоримой роли DVC1 и p97 в синтезе TLS.
Однако точный механизм функции DVC1 и его взаимодействие с p97 на остановившихся вилках репликации до сих пор полностью не изучены. Во-первых, неясно, зависит ли рекрутирование DVC1 на застопорившиеся репликационные вилки от лигазы Rad18 E3. Хотя три исследовательские группы утверждают, что рекрутирование DVC1 в УФ-поражения зависит от Rad18 (Centore et al.
, 2012; Ghosal et al., 2012; Juhasz et al., 2012), две другие исследовательские группы сообщили, что рекрутирование DVC1 не зависит от Rad18 (Davis et al., 2012; Mosbech et al., 2012). Во-вторых, две группы утверждают, что DVC1 приносит Rad18 в хроматин и усиливает моноубиквитинирование PCNA (Centore et al., 2012; Ghosal et al., 2012), тогда как другие не наблюдали этого эффекта. В-третьих, одна исследовательская группа также предположила, что DVC1 рекрутируется в остановленные репликационные вилки с помощью Rad18 и PCNA-моноубиквитинирования, защищая моноубиквитинированную PCNA от деубиквитинирования (Juhasz et al., 2012). В-четвертых, две группы сообщили, что DVC1 рекрутирует p97 в застопорившиеся репликационные вилки для извлечения полимера ДНК и позволяет переключиться на репликативные полимеразы после обхода УФ-поражения (Davis et al., 2012; Mosbech et al., 2012). Напротив, одна группа показала, что DVC1 выполняет противоположную функцию, удаляя дельта репликативной полимеразы в УФ-поражениях, чтобы позволить рекрутирование политик ДНК (Ghosal et al.
, 2012).
В дополнение к вышеупомянутой функции DVC1 в безошибочном TLS, управляемой переключением между политикой ДНК и дельтой ДНК, DVC1 также отрицательно влияет на подверженный ошибкам TLS, организованный переключателем политики ДНК / политикой ДНК, поддерживаемым Rev1 и PolD3 (Ким и др., 2013). DVC1 и его домен SprT подавляют связывание PolD3 с ДНК-polzeta, чтобы ингибировать подверженный ошибкам TLS.
Даже несмотря на то, что точное понимание механизма DVC1 в TLS еще не ясно, DVC1 играет решающую роль в TLS, вероятно, за счет стимулирования безошибочного TLS и подавления подверженного ошибкам TLS. Дальнейшие исследования будут необходимы для выяснения точной функции DVC1 при остановленных вилках репликации и вовлечении p97.
p97 в репарации двухцепочечного разрыва ДНК и реакции на повреждение
Двухцепочечный разрыв — наиболее опасное повреждение ДНК.Если его не исправить, это может вызвать хромосомные перестройки, делеции и нестабильность генома или гибель клеток.
Одиночный DSB может вызывать летальность клеток у дрожжей, что позволяет предположить, что это высокоцитотоксическое повреждение ДНК, которое необходимо немедленно обнаруживать и обрабатывать (Bennett et al., 1993). Подсчитано, что примерно 1% эндогенных разрывов одноцепочечной ДНК превращается в DSB во время S фазы в клетках млекопитающих, что коррелирует с примерно 50 эндогенными DSB на клеточный цикл (Vilenchik and Knudson, 2003). DSB также возникают в результате определенных медицинских вмешательств, связанных с диагностикой или терапией (например,г., рентген). Чтобы предотвратить нестабильность генома, убиквитинирование и сумоилирование стали важными PTM в регулировании репарации DDR и DSB.
До недавнего времени RNF8 / RNF168-зависимая цепь Lys63-убиквитин рассматривалась как единственный путь передачи сигналов убиквитина в сайтах DSB (Doil et al., 2009; Stewart et al., 2009; Al-Hakim et al., 2010). ; Ульрих, Уолден, 2010; Маттироли и др., 2012). Эта парадигма изменилась, когда функция p97 была идентифицирована при репарации DDR и DSB (Acs et al.
, 2011; Meerang et al., 2011; Рамадан, 2012 г.). Комплекс p97 Ufd1 –Npl4 рекрутируется в сайты DSB вскоре после того, как происходит повреждение. Рекрутирование комплекса p97 Ufd1 –Npl4 в сайты DSBs сильно зависит от активности свободного ядерного убиквитина и E3-ubiquitin ligase RNF8, но не от E3 лигазы RNF168 (Meerang et al., 2011). Это свидетельствует о наличии каскада, управляемого RNF8 / RNF168, и единственного каскада, управляемого RNF8, в сайтах DNB, что было подтверждено с использованием антител Lys63 или Lys48, специфичных для цепи убиквитина.В то время как истощение RNF8 и RNF168 полностью устраняет образование цепей Lys63- и Lys48-убиквитина в местах повреждения ДНК, истощение RNF168 устраняет только образование цепей Lys63-убиквитина. Рекрутирование p97 в сайты DSB сильно зависит от образования цепи RNF8 / K48-ubiquitin. Истощение p97 или экспрессия мутантов p97 сегрегазы вызывает повышенные уровни и сохранение цепей Lys48-убиквитина на сайтах DSB.
Эти данные ясно демонстрируют, что p97 рекрутируется в сайты DSB через цепи Lys48-убиквитина, образованные RNF8, и извлекает их из хроматина.p97 процессинг Lys48-убиквитинированных субстратов вскоре после DSBs важен для рекрутирования сигнальных и репарационных молекул, таких как 53BP1, BRCA1 и Rad51 (Meerang et al., 2011). Неспособность клеток, инактивированных p97, обрабатывать Lys48-убиквитинированные субстраты в сайтах DSB, серьезно снижает основные ветви репарации DSB, гомологичной рекомбинации и негомологичного концевого соединения. Конкретные субстраты p97 в сайтах повреждения ДНК и механизмы, с помощью которых p97 влияет на основные ветви пути репарации DSB, остаются неизвестными.Обнаружение субстрата p97 polycomb белка L3MBTL1 в непосредственной близости от DSB объясняет, почему инактивация активности сегрегазы p97 устраняет рекрутирование белка 53BP1. L3MBTL1 обладает множественными тандемными Tudor доменами, которые делают возможным его высокое сродство связывать h5Lys20me2 в неповрежденном хроматине (Acs et al.
, 2011). После возникновения DSB L3MBTL1 удаляется p97 и позволяет рекрутировать 53BP1 своим собственным доменом Tudor в h5Lys20me2. Регуляция p97 в рекрутировании двух др. важных сигнальных и репарационных белков, BRCA1 и Rad51, еще предстоит исследовать.Эти данные устанавливают ранее нераспознанные каскады убиквитина RNF8-Lys48 на сайтах DSB, которые рекрутируют активность сегрегазы p97 –Ufd1 –Npl4 для обработки субстратов Lys48-ubiquitin (Ramadan, 2012).
Cdc48 –Ufd1 –Npl4 , дрожжевой гомолог p97 Ufd1 –Npl4 , участвует в процессинге сумоилированных и убиквитинированных субстратов в местах повреждения ДНК (Nie et al., 2012). Ufd1 дрожжей содержит SUMO-взаимодействующий мотив (SIM), который нековалентно связывает конъюгаты SUMO и привлекает комплекс Cdc48 –Ufd1 –Npl4 к мишеням STUbL.Cdc48 –Ufd1 –Npl4 кооперируется с STUbL в репарации ДНК для уменьшения застопорившихся аддуктов ковалентной ДНК топоизомераза1-ДНК путем связывания и обработки сумоилированных и убиквитинированных субстратов в местах повреждения ДНК.
Неизвестно, участвует ли комплекс p97 –Ufd1 –Npl4 человека в двойном распознавании сумоилированных и убиквитинированных субстратов в сайтах повреждения ДНК.
p97 в эксцизионном восстановлении связанных с транскрипцией нуклеотидов
Широкий спектр повреждений, искажающих спираль ДНК, таких как УФ-индуцированные фоторазрушения (димеры тимина) и аддукты ДНК, вызванные химическими веществами в транскрибируемой ДНК, блокируют развитие комплекса РНК pol II.Блокирование транскрипции на участках повреждения ДНК представляет собой серьезное препятствие для репликации ДНК и приводит к коллапсу вилки репликации ДНК. Чтобы предотвратить коллапс репликационной вилки ДНК на сайтах остановленной транскрипции и избежать апоптоза, клетки активируют TC-NER, подпуть NER. TC-NER быстро удаляет повреждения из транскрибированной цепи и позволяет транскрипции продолжаться (Fousteri and Mullenders, 2008; Lehmann, 2011a). При индукции повреждения ДНК УФ- или УФ-миметическими препаратами образуются димеры тимина, транскрипция останавливается, и активируется подпути TC-NER.
Остановленная транскрипция привлекает E3 ubiquitin ligase Cul3 для убиквитинирования комплекса RNA pol II и примирования его для протеасомной деградации (Chen et al., 2007; Ribar et al., 2007). Предполагается, что застопорившийся комплекс РНК pol II экранирует повреждения ДНК и предотвращает доступ механизма NER. В результате комплекс должен быть удален и деградирован. Комплекс Cdc48 Ufd1 –Npl4 вместе с Ubx4 и Ubx5 (человеческие гомологичные UBXD9 и UBXD7) играют важную роль в УФ-зависимом обороте застопорившегося комплекса РНК pol II в дрожжах (Verma et al., 2011). Комплекс Cdc48 Ufd1 –Npl4 –Ubx4 –Ubx5 рекрутируется в местах УФ-индуцированного повреждения и способствует CAD Rpb1, самой большой субъединицы pol II РНК. Остановившийся комплекс РНК pol II также стимулирует повышенное рекрутирование протеасом в участках УФ-повреждений, которые образуют плотный комплекс с p97 / Cdc48. Эти результаты предполагают тесное сотрудничество между p97 / Cdc48 и протеасомами в местах УФ-повреждений на самой ранней стадии TC-NER.
Помимо своего участия в восходящем этапе TC-NER, p97 также участвует в синтезе ДНК, заполняющем пробелы, который является заключительным этапом обоих подпутей NER, TC-NER и глобального генома-NER (GG-NER; Raman et al., 2011). Во время гэп-синтеза p97 способствует сегрегации и деградации связанного с PCNA Cdt1, чтобы предотвратить повторную репликацию (Raman et al., 2011; Ramanathan and Ye, 2011). Вместе эти результаты указывают на то, что p97 действует на разных уровнях в обоих подпутьях NER. Было бы интересно посмотреть, работает ли и как p97 на ранних этапах GG-NER.
p97 и заболевания, связанные со стабильностью генома
p97 вовлечен в патогенез многих заболеваний человека, включая рак груди, толстой кишки, легких, предстательной железы и поджелудочной железы, хроническую обструктивную болезнь легких и тяжелую эмфизему, муковисцидоз, дефицит альфа-1-трипсина, болезнь Педжета и некоторые другие. типы нейродегенеративных расстройств (Vij, 2008; Haines, 2010; Min et al.
, 2011). Миопатия с тельцами включения, связанная с костной болезнью Педжета и лобно-височной деменцией (IBMPFD), является единственным заболеванием, которое на сегодняшний день напрямую связано с дисфункцией p97 (Kimonis et al., 2008). Мутации p97 связаны с 2% изолированного семейного бокового амиотрофического склероза (ALS; Johnson et al., 2010). IBMPFD — аутосомно-доминантно-негативное наследственное дегенеративное заболевание, вызванное единственной миссенс-мутацией в p97 у человека. Во всем мире существует несколько семейств с IBMPFD, но мутации в основном локализуются в N-концевой области, линкерной области между N-концевой и D1 областью и в области D1 (Weihl et al., 2009). IBMPFD характеризуется инвалидизирующей слабостью, остеолитическими поражениями, соответствующими костной болезни Педжета и лобно-височной деменцией. Накопление цитоплазматических и ядерных убиквитин-положительных агрегатов в тканях пациентов с IBMPFD предполагает, что процессинг p97 убиквитинированных субстратов является ключевым механизмом, участвующим в патогенезе.
Поскольку p97 обрабатывает субстраты для путей лизосомной и протеасомной деградации, неясно, какой путь затрагивается при IBMPFD (Janiesch et al., 2007; Джу и Вейль, 2010а; Ритц и др., 2011).
Пациенты с ИБМПФД не страдают фенотипами геномной нестабильности, характеризующимися преждевременным старением и / или развитием рака. Например, частота осложнений остеосаркомы при костной болезни Педжета составляет менее 1% (Hansen et al., 2006). Напротив, протеасомная деградация играет решающую роль в различных аспектах стабильности генома (Shi et al., 2008; Ramadan and Meerang, 2011; Galanty et al., 2012; Ramadan, 2012). Дефекты лизосомальной деградации скорее, чем дефекты протеасомной деградации, вероятно, вносят вклад в патогенез IBMPFD.Имеются данные, подтверждающие гипотезу о том, что нарушение функционирования p97 при лизосомной деградации является основной причиной IBMPFD.
Хотя нет прямых доказательств того, что мутации p97 играют роль в заболеваниях, связанных со стабильностью генома, в этом обзоре мы приводим доказательства, подтверждающие важную, консервативную роль p97 в стабильности генома от дрожжей до человека.
Кроме того, p97 или его адаптеры регулируют белки, участвующие в онкогенезе, такие как Aurora B (сверхэкспрессируется в раковых клетках и участвует в стабильности генома), IκB [потенциальный ингибитор функции выживания ядерного фактора каппа B (NFκB)] или HIF1a. (промотор опухолевого ангиогенеза и метастазов; Asai et al., 2002; Рамадан и др., 2007; Александру и др., 2008; Добрынин и др., 2011). Повышенная экспрессия p97 коррелирует с прогрессированием, прогнозом и метастатическим потенциалом многих видов рака (Yamamoto et al., 2003, 2004a, b, d). Например, высокий уровень белка p97 коррелирует с колоректальной карциномой (Yamamoto et al., 2004c). Низкие уровни экспрессии p97 наблюдались в аденомах, в то время как высокие уровни наблюдались во всех метастатических опухолях. Пациенты с опухолями, которые экспрессируют высокие уровни p97, демонстрируют более высокую частоту рецидивов, более низкие периоды без признаков болезни и общую выживаемость по сравнению с пациентами с опухолями, которые имеют низкую экспрессию p97, что позволяет предположить, что высокие уровни p97 указывают на плохой прогноз.
Подобно колоректальному раку, p97 сверхэкспрессируется при немелкоклеточной карциноме легкого (NSCLC; Yamamoto et al., 2004b). Все описанные данные основаны на корреляции между уровнем белка p97 и развитием и прогрессированием рака. Неизвестно, увеличивает ли повышенная экспрессия p97 деградацию белков, ингибирующих рост, или повышенная экспрессия является клеточной реакцией на индуцированный белками стресс при раке (Haines, 2010). Однако ингибирование p97 небольшой молекулой значительно снижает рост опухоли NSCLC в моделях in vitro и in vivo (Valle et al., 2011). Это предполагает, что повышенные уровни p97 могут быть непосредственно ответственны за онкогенез.
Нет никаких доказательств того, что мутации в p97 связаны с раком. Учитывая его убиквитин-зависимые функции в различных процессах, связанных с пролиферацией и поддержанием белкового гомеостаза, можно предположить, что раковые клетки полагаются на интактную функцию p97.
Поскольку p97 необходим для выживания клеток, можно ожидать, что изменения в его адаптерах вызовут рак.
Гаплонедостаточность гена FAF1, члена семейства адаптеров UBX, наблюдалась в 30% карцином шейки матки и 12.5% лимфом из клеток мантии (Hidalgo et al., 2005; Bea et al., 2009). Уровни белка FAF1 подавляются при карциномах желудка и большом проценте мезотелиом (Bjorling-Poulsen et al., 2003; Altomare et al., 2009).
p97 и адаптер FAF1, вероятно, играют важную роль в развитии рака, хотя четкие молекулярные механизмы не выяснены.
Прямое доказательство участия p97 в стабильности генома и развитии рака было недавно обнаружено в результате открытия нового синдрома преждевременного старения, обусловленного гомозиготной мутацией в адаптере p97 DVC1.DVC1 рекрутирует p97 в застопорившиеся репликационные вилки и играет важную роль в предотвращении мутагенеза. Мутация DVC1 при новом синдроме преждевременного старения устраняет рекрутирование p97 в застопорившиеся репликационные вилки, что, как следствие, вызывает коллапс репликационной вилки ДНК и повышенный уровень хромосомных аберраций (представлены наши неопубликованные результаты, D.
Lessel et al., Представленные).
Заключение
Как один из наиболее распространенных клеточных белков, p97 необходим для развития, пролиферации и роста клеток.p97 недавно появился как центральный элемент в системе убиквитина, участвующий как в протеасомных, так и в лизосомных путях деградации, а также в зависимых от убиквитина, независимых от деградации процессах. Центральной функцией ферментативной активности p97 является преобразование собственной активности АТФазы в активность ремоделирования для высвобождения (извлечения) и обработки множества убиквитинированных субстратов из различных участков клетки. p97 играет важную роль в гомеостазе белков и защите от белкового стресса из-за накопления короткоживущих, неправильно свернутых, старых и поврежденных белков.Разнообразие p97, связанного с множеством убиквитинированных субстратов в различных клеточных процессах, регулируется множеством адаптеров. Иерархия адаптеров, основанная на втором уровне адаптеров p97, в основном из семейства UBX, управляет тремя основными комплексными адаптерами p97: p97 –U fd1 –Npl4 , p97 –p47 и p97 –UBXD1 .
Хотя роль p97 в клеточном цикле и репарации ДНК была известна в течение нескольких десятилетий, его функция в стабильности генома начинает проявляться (рис. 4).Выявление CAD, организованного p97 в репликации ДНК, репарации ДНК и открытие DVC1, наконец, установило роль p97 в стабильности генома. Это было дополнительно продемонстрировано открытием нового синдрома преждевременного старения у человека из-за гомозиготной мутации в адаптере p97 DVC1. Хотя сверхэкспрессия p97 коррелирует с прогрессированием опухоли, инактивация p97 или его адаптеров приводит к нестабильности генома. Эти факты подтверждают гипотезу о том, что жесткая регуляция системы p97 необходима для стабильности генома и защиты от рака.Понимание того, как p97 защищает клетки от PICHROS и его функции в репликации ДНК, репарации, рекомбинации, митозе и клеточном цикле, будет иметь важное значение для полного понимания роли p97 в стабильности генома, старении и раке. Многие вопросы ждут дальнейшего изучения, такие как идентификация p97-субстратов, адаптеров и путей, которые вносят вклад в стабильность генома.
p97 имеет широкий спектр адаптеров, многие из которых обладают убиквитин-связывающими доменами. Это убедительно свидетельствует о том, что p97, скорее всего, связывает и модулирует множество убиквитинированных субстратов, помимо уже известных и описанных в этом обзоре, которые необходимы для стабильности генома.Следовательно, мы должны идентифицировать другие связанные с CAD субстраты p97, а также состав p97-адаптера для конкретных субстратов, связанных со стабильностью генома. Хотя это кажется простым, второй уровень p97-адаптеров и E3-убиквитин-лигаз для многих установленных путей и субстратов все еще неизвестен, на что указывают вопросительные знаки на рисунке 4. В дополнение к его роли во многих клеточных процессах (рисунок 4; пятая). ring), p97, скорее всего, также играет роль в других путях и процессах, контролируемых убиквитином, которые непосредственно регулируют стабильность генома, таких как репарация эксцизией оснований, репарация несовпадений, контрольные точки повреждения ДНК и апоптоз.
Наконец, понимание сложной функции p97, его адаптеров и субстратов в стабильности генома может напрямую помочь в разработке нового и более эффективного противоракового препарата (ов). Это предположение основано на эффектах бортезомиба (Velcade), ингибитора протеасом, который в настоящее время используется для лечения множественной миеломы и лимфомы из мантийных клеток, и на удивительных результатах, показывающих, что ингибитор p97 значительно снижает рост опухоли NSCLC в моделях in vitro и in vivo (Валле и др., 2011). Вместе взятые, можно предвидеть интересное и динамичное время в изучении функции p97 в контексте стабильности генома и терапии рака.
РИСУНОК 4. Роль p97 в стабильности генома. Круг представляет собой сводку функций p97 в различных клеточных процессах, от дрожжей до человека, которые необходимы для поддержания стабильности генома. Ключевые игроки из разных видов сокращенно обозначаются гомологами человека (например, дрожжевые Cdc48 и Ubx5 эквивалентны человеческим p97 и UBXD7).
Гомогексамер p97 расположен в центре. Первое кольцо (синее) представляет два основных адаптерных комплекса, Ufd1 – Npl4 и p47. Второе кольцо (оранжевое) представляет следующий уровень адаптеров p97, которые управляют функцией ядерных комплексов p97. DVC1 направляет функцию p97 –Ufd1 –Npl4 к TLS, а UBXD7 и UBXD9 направляют p97 –Ufd1 –Npl4 к остановленной транскрипции и TC-NER. Третье кольцо (серое) представляет собой убиквитинлигазы Е3, которые убиквитинируют субстраты р97.Четвертое кольцо (зеленое) представляет собой p97-субстраты, которые должны быть ремоделированы (извлечены) с помощью p97, чтобы избежать PICHROS и предотвратить нестабильность генома. Пятое кольцо (белое) представляет различные клеточные процессы, в которых p97 играет важную роль для поддержания стабильности генома. PP1, белковые фосфаты 1 / Glc7 в дрожжах; Ингибитор CDK, ингибитор циклин-зависимой киназы Far1p в дрожжах; L3MBTL1, белок поликомб, содержащий домен злокачественной опухоли головного мозга (MBT); CDT1, лицензирование хроматина и фактор репликации ДНК 1; SET8, гистон-метилтрансфераза; XMAP215, процессивная полимераза микротрубочек; TPX2, белок, связанный с микротрубочками; PLX1, поло-подобная киназа; ДНК pol δ и η ДНК-полимеразы дельта и эта.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Совет медицинских исследований, Швейцарский национальный научный фонд, Фонд биомедицинских исследований Новартис и Швейцарский фонд исследований жизни за поддержку лаборатории Рамадана. Мы благодарим членов нашей группы за их предложения по этой работе.Приносим извинения коллегам, чьи работы не цитировались.
Список литературы
Acs, K., Luijsterburg, M. S., Ackermann, L., Salomons, F. A., Hoppe, T., and Dantuma, N. P. (2011). AAA-ATPase VCP / p97 способствует привлечению 53BP1 путем удаления L3MBTL1 из двухцепочечных разрывов ДНК. Nat. Struct. Мол. Биол. 18, 1345–1350.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Александру, Г.
, Грауман, Дж., Смит, Г. Т., Колава, Н. Дж., Фанг, Р., и Деше, Р.J. (2008). UBXD7 связывает несколько убиквитинлигаз и задействует p97 в обороте HIF1alpha. Cell 134, 804–816.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Аль-Хаким, А., Эскрибано-Диас, К., Ландри, М. К., О’Доннелл, Л., Панье, С., Сцилард, Р. К. и др. (2010). Повсеместная роль убиквитина в ответе на повреждение ДНК. Ремонт ДНК (Amst.) 9, 1229–1240.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Альтомаре, Д.A., Menges, C. W., Pei, J., Zhang, L., Skele-Stump, K. L., Carbone, M., et al. (2009). Активировал передачу сигналов TNF-alpha / NF-kappaB посредством подавления Fas-ассоциированного фактора 1 в индуцированных асбестом мезотелиомах мышей с нокаутом Arf. Proc. Natl. Акад. Sci. США 106, 3420–3425.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Asai, T., Tomita, Y., Nakatsuka, S., Hoshida, Y.
, Myoui, A., Yoshikawa, H., et al. (2002). VCP (p97) регулирует сигнальный путь NFkappaB, который важен для метастазирования клеточной линии остеосаркомы. Jpn. J. Cancer Res. 93, 296–304.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Bea, S., Salaverria, I., Armengol, L., Pinyol, M., Fernandez, V., Hartmann, E.M, et al. (2009). Однородительские дисомии, гомозиготные делеции, амплификации и гены-мишени в лимфоме из мантийных клеток выявлены с помощью интегративного полногеномного профилирования с высоким разрешением. Кровь 113, 3059–3069.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Беннет, К.Б., Льюис, А. Л., Болдуин, К. К., и Резник, М. А. (1993). Летальность, вызванная одинарным сайт-специфическим двухцепочечным разрывом в необязательной дрожжевой плазмиде. Proc. Natl. Акад. Sci. США 90, 5613–5617.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Бесков А.
, Гримберг К. Б., Ботт Л. К., Саломонс Ф. А., Дантума Н. П. и Янг П. (2009). Консервативная разворачивающая активность для p97 AAA-ATPase при протеасомной деградации. J. Mol. Биол. 394, 732–746.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Бьорлинг-Поульсен, М., Зейтц, Г., Герра, Б., и Иссинджер, О. Г. (2003). Проапоптотический фактор 1, связанный с FAS, специфически снижается при карциномах желудка человека. Внутр. J. Oncol. 23, 1015–1023.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Батлер, Л. Р., Деншем, Р. М., Джиа, Дж., Гарвин, А. Дж., Стоун, Х. Р., Шах, В. и др. (2012). Протеасомный деубиквитинирующий фермент POh2 способствует ответу на разрыв двухцепочечной ДНК. EMBO J. 31, 3918–3934.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кармена М., Уилок М., Фунабики Х. и Эрншоу В. К. (2012). Хромосомный пассажирский комплекс (КПК): от легкого гонщика до крестного отца митоза.
Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13, 789–803.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Карузо, М. Э., Дженна, С., Бушекарей, М., Бэйли, Д. Л., Бойсмену, Д., Халавани, Д., и другие. (2008). GTPase-опосредованная регуляция ответа развернутого белка у Caenorhabditis elegans зависит от AAA + ATPase CDC-48. Мол. Клетка. Биол. 28, 4261–4274.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Чен, X., Руджеро, К., и Ли, С. (2007). Дрожжевой Rpb9 играет важную роль в убиквитилировании и деградации Rpb1 в ответ на УФ-индуцированное повреждение ДНК. Мол. Клетка. Биол. 27, 4617–4625.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Дэвис, Э.Дж., Лашо, К., Эпплтон, П., Макартни, Т. Дж., Натке, И., и Роуз, Дж. (2012). DVC1 (C1orf124) привлекает сегрегазу белка p97 к участкам повреждения ДНК. Nat. Struct. Мол. Биол. 19, 1093–1100.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Добрынин Г.
, Попп О., Ромер Т., Бремер С., Шмитц М. Х., Герлих Д. В. и др. (2011). Cdc48 / p97-Ufd1-Npl4 противодействует Aurora B во время сегрегации хромосом в клетках HeLa. J. Cell Sci. 124, 1571–1580.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Дойл К., Майланд Н., Беккер-Йенсен С., Менард П., Ларсен Д. Х., Пепперкок Р. и др. (2009). RNF168 связывает и усиливает конъюгаты убиквитина на поврежденных хромосомах, обеспечивая накопление репаративных белков. Cell 136, 435–446.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Франц А., Орт М., Пирсон П. А., Сонневиль Р., Блоу Дж. Дж., Гартнер А. и др.(2011). CDC-48 / p97 координирует деградацию CDT-1 с диссоциацией хроматина GINS для обеспечения точной репликации ДНК. Мол. Ячейка 44, 85–96.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Галанты Ю., Белоцерковская Р., Коутс Дж., Джексон С. П. (2012). RNF4, нацеленная на SUMO лигаза убиквитина E3, способствует репарации двухцепочечных разрывов ДНК.
Genes Dev. 26, 1179–1195.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Госал, Г., Леунг, Дж. У., Наир, Б. К., Фонг, К. В., и Чен, Дж. (2012). Белок C1orf124, связывающий ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA), является регулятором синтеза трансфузии. J. Biol. Chem. 287, 34225–34233.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Gudjonsson, T., Altmeyer, M., Savic, V., Toledo, L., Dinant, C., Grofte, M., et al. (2012). TRIP12 и UBR5 подавляют распространение убиквитилирования хроматина на поврежденные хромосомы. Cell 150, 697–709.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Идальго А., Баудис М., Петерсен И., Арреола Х., Пина П., Васкес-Ортис Г. и др. (2005). Сравнительная геномная гибридизация на микрочипах: обнаружение хромосомных дисбалансов при раке шейки матки. BMC Рак 5:77. DOI: 10.1186 / 1471-2407-5-77
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Се, М.
Т., и Чен, Р. Х. (2011). Cdc48 и кофакторы Npl4-Ufd1 важны для прогрессирования G1 во время теплового стресса, поддерживая целостность клеточной стенки в Saccharomyces cerevisiae . PLoS ONE 6: e18988. DOI: 10.1371 / journal.pone.0018988
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Индиг, Ф. Э., Партридж, Дж. Дж., Фон Коббе, К., Аладжем, М. И., Латтерих, М., и Бор, В. А. (2004). Белок синдрома Вернера напрямую связывается с АТФазой p97 / VCP АТФ-зависимым образом. J. Struct. Биол. 146, 251–259.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Janiesch, P.C., Kim, J., Mouysset, J., Barikbin, R., Lochmuller, H., Cassata, G., et al. (2007). Убиквитин-селективный шаперон CDC-48 / p97 связывает сборку миозина с миопатией человека. Nat. Cell Biol. 9, 379–390.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Джонсон, Дж. О., Мандриоли, Дж., Бенатар, М., Абрамзон, Ю.
, Ван Дирлин, В. М., Трояновски, Дж. К. и др. (2010). Секвенирование экзома выявляет мутации VCP как причину семейного БАС. Нейрон 68, 857–864.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Джу, Дж. С., Фуэнтеалба, Р. А., Миллер, С. Е., Джексон, Э., Пивница-Вормс, Д., Бало, Р. Х. и др. (2009). Валозин-содержащий белок (VCP) необходим для аутофагии и нарушается при заболевании VCP. J. Cell Biol. 187, 875–888.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Juhasz, S., Balogh, D., Hajdu, I., Burkovics, P., Villamil, M.A., Zhuang, Z., et al. (2012).Характеристика человеческого Spartan / C1orf124, регулятора устойчивости к повреждению ДНК, взаимодействующего с убиквитином и PCNA. Nucleic Acids Res. 40, 10795–10808.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ким, М. С., Мачида, Ю., Вашишт, А. А., Вольшлегель, Дж. А., Панг, Ю. П., и Мачида, Ю. Дж. (2013). Регулирование склонного к ошибкам синтеза транслезии с помощью Spartan / C1orf124.
Nucleic Acids Res. 41, 1661–1668.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Кимонис, В.Э., Фульчиеро Э., Веса Дж. И Уоттс Г. (2008). Заболевание VCP, связанное с миопатией, костная болезнь Педжета и лобно-височная деменция: обзор уникального заболевания. Biochim. Биофиз. Acta 1782, 744–748.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Клоппстек, П., Ювенс, К. А., Форстер, А., Чжан, X., Фримонт, П. С. (2012). Регулирование p97 в системе убиквитин-протеасома с помощью семейства белков UBX. Biochim. Биофиз. Acta 1823, 125–129.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Леви-Барда А., Леренталь Ю., Дэвис А. Дж., Чунг Ю. М., Эссерс Дж., Шао З. и др. (2011). Участие активатора ядерной протеасомы PA28gamma в клеточном ответе на двухцепочечные разрывы ДНК. Cell Cycle 10, 4300–4310.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ливингстон, М.
, Руан, Х., Вайнер, Дж., Клаузер, К. Р., Страк, П., Джин, С. и др.(2005). Фосфорилирование валозин-содержащего белка по Ser784 в ответ на повреждение ДНК. Cancer Res. 65, 7533–7540.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Мадео, Ф., Шлауэр, Дж., Зишка, Х., Меке, Д., и Фрелих, К. У. (1998). Фосфорилирование тирозина регулирует зависимую от клеточного цикла ядерную локализацию Cdc48p. Мол. Биол. Cell 9, 131–141.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Маллетт, Ф.А., Маттироли, Ф., Цуй, Г., Янг, Л. К., Хендзель, М. Дж., Мер, Г. и др. (2012). RNF8- и RNF168-зависимая деградация KDM4A / JMJD2A запускает рекрутирование 53BP1 в сайты повреждения ДНК. EMBO J. 31, 1865–1878.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Маттироли, Ф., Виссерс, Дж. Х., Ван Дейк, У. Дж., Икпа, П., Читтерио, Э., Вермёлен, В. и др. (2012). RNF168 убиквитинирует K13-15 на h3A / h3AX, чтобы управлять передачей сигналов повреждения ДНК.
Cell 150, 1182–1195.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Миранг, М., Ritz, D., Paliwal, S., Garajova, Z., Bosshard, M., Mailand, N., et al. (2011). Убиквитин-селективная сегрегаза VCP / p97 управляет ответом на двухцепочечные разрывы ДНК. Nat. Cell Biol. 13, 1376–1382.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Мойр Д., Стюарт С. Е., Осмонд Б. К. и Ботштейн Д. (1982). Чувствительные к холоду мутанты дрожжевого цикла клеточного деления: изоляция, свойства и исследования псевдореверсии. Генетика 100, 547–563.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Мосбеч А., Гиббс-Сеймур И., Кагиас К., Торслунд Т., Бели П., Повлсен Л. и др. (2012). DVC1 (C1orf124) представляет собой адаптер p97, направленный на повреждение ДНК, который способствует убиквитин-зависимым ответам на блоки репликации. Nat. Struct. Мол. Биол. 19, 1084–1092.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Mouysset, J.
, Deichsel, A., Moser, S., Hoege, C., Hyman, A.A., Gartner, A., et al.(2008). Для развития клеточного цикла требуется комплекс CDC-48UFD-1 / NPL-4 для эффективной репликации ДНК. Proc. Natl. Акад. Sci. США 105, 12879–12884.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Nie, M., Aslanian, A., Prudden, J., Heideker, J., Vashisht, A.A., Wohlschlegel, J.A., et al. (2012). Двойное привлечение Cdc48 (p97) -Ufd1-Npl4 убиквитин-селективной сегрегазы небольшим убиквитин-подобным белком-модификатором (SUMO) и убиквитином в SUMO-нацеленных функциях стабильности генома, опосредованных убиквитинлигазой. J. Biol. Chem. 287, 29610–29619.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Партридж, Дж. Дж., Лопрейато, Дж. О., младший, Латтерих, М., и Индиг, Ф. Э. (2003). Повреждение ДНК модулирует ядрышковое взаимодействие белка Вернера с ААА-АТФазой p97 / VCP. Мол. Биол. Ячейка 14, 4221–4229.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Петерс, Дж.
М., Уолш, М. Дж., И Франке, В. У. (1990). Обильная и повсеместная гомоолигомерная кольцевая частица АТФазы, связанная с предполагаемыми белками слияния везикул Sec18p и NSF. EMBO J. 9, 1757–1767.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст
Прудден, Дж., Пебернард, С., Раффа, Г., Славин, Д. А., Перри, Дж. Дж., Тайнер, Дж. А. и др. (2007). SUMO-нацеленные убиквитинлигазы в стабильности генома. EMBO J. 26, 4089–4101.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рамадан К., Брудерер Р., Спига Ф. М., Попп О., Баур Т., Готта М. и др. (2007). Cdc48 / p97 способствует реформированию ядра путем извлечения киназы Aurora B из хроматина. Природа 450, 1258–1262.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рамадан, К., Миранг, М. (2011). Связанный с деградацией сигнал убиквитина и протеасома являются неотъемлемыми компонентами репарации двухцепочечных разрывов ДНК: новые перспективы противораковой терапии.
FEBS Lett. 585, 2868–2875.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Раман, М., Хэвенс, К. Г., Уолтер, Дж. К., и Харпер, Дж. У. (2011).Полногеномный скрининг идентифицирует p97 как важный регулятор деструкции CDT1, зависимой от повреждений ДНК. Мол. Cell 44, 72–84.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Рибар Б., Пракаш Л. и Пракаш С. (2007). ELA1 и CUL3 необходимы наряду с ELC1 для полиубиквитилирования РНК-полимеразы II и деградации в поврежденных ДНК дрожжевых клетках. Мол. Клетка. Биол. 27, 3211–3216.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ритц, Д., Вук, М., Кирхнер, П., Баг, М., Шутц, С., Хайер, А. и др. (2011). Эндолизосомная сортировка убиквитилированного кавеолина-1 регулируется VCP и UBXD1 и нарушается мутациями болезни VCP. Nat. Cell Biol. 13, 1116–1123.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Rouiller, I.
, Delabarre, B., May, A. P., Weis, W. I., Brunger, A. T., Milligan, R.A., et al. (2002). Конформационные изменения многофункциональной АТФазы p97 AAA во время ее цикла АТФазы. Nat. Struct. Биол. 9, 950–957.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Сасагава, Ю., Хигаситани, А., Урано, Т., Огура, Т., и Яманака, К. (2012). CDC-48 / p97 необходим для правильной сегрегации мейотических хромосом посредством контроля локализации киназы AIR-2 / Aurora B у Caenorhabditis elegans . J. Struct. Биол. 179, 104–111.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ши, В., Ма, З., Виллерс, Х., Ахтар, К., Скотт, С. П., Чжан, Дж. И др. (2008). Разборка фокусов MDC1 контролируется убиквитин-протеасомозависимой деградацией. J. Biol. Chem. 283, 31608–31616.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Стюарт, Г. С., Паньер, С., Таунсенд, К., Аль-Хаким, А. К., Колас, Н.
К., Миллер, Э. С. и др. (2009). Белок синдрома RIDDLE опосредует убиквитин-зависимый сигнальный каскад в местах повреждения ДНК. Ячейка 136, 420–434.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Тресс, Э., Саломонс, Ф. А., Веса, Дж., Ботт, Л. К., Кимонис, В., Яо, Т. П. и др. (2010). VCP / p97 необходим для созревания убиквитин-содержащих аутофагосом, и эта функция нарушается мутациями, вызывающими IBMPFD. Аутофагия 6, 217–227.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Валле, К. В., Мин, Т., Бодас, М., Мазур, С., Бегум, С., Тан, Д., и другие. (2011). Критическая роль VCP / p97 в патогенезе и прогрессировании немелкоклеточной карциномы легкого. PLoS ONE 6: e29073. DOI: 10.1371 / journal.pone.0029073
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Верма Р., Оаниа Р., Фанг Р., Смит Г. Т. и Деше Р. Дж. (2011). Cdc48 / p97 опосредует УФ-зависимый оборот РНК Pol II.
Мол. Ячейка 41, 82–92.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Верма, Р., Оания, Р. С., Колава, Н. Дж., И Дешайс, Р. Дж. (2013). Cdc48 / p97 способствует деградации аберрантных растущих полипептидов, связанных с рибосомой. eLife 2: e00308. DOI: 10.7554 / eLife.00308
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Weihl, C.C., Pestronk, A., and Kimonis, V.E. (2009). Валозин-содержащая белковая болезнь: миопатия телец включения с костной болезнью Педжета и лобно-височной деменцией. Neuromuscul. Disord. 19, 308–315.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Уилкокс, А. Дж., И Лэйни, Дж. Д. (2009). Убиквитин-селективная ААА-АТФаза опосредует переключение транскрипции путем ремоделирования комплекса репрессор-промотор ДНК. Nat. Cell Biol. 11, 1481–1486.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямамото С.
, Томита Ю., Хосида Ю., Иидзука Н., Кидогами С., Мията Х. и др. (2004a). Уровень экспрессии валозин-содержащего белка (p97) связан с прогнозом рака пищевода. Clin. Cancer Res. 10, 5558–5565.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямамото С., Томита Ю., Хосида Ю., Иидзука Н., Монден М., Юти К. и др. (2004b). Уровень экспрессии валозин-содержащего белка (p97) коррелирует с прогрессированием и прогнозом немелкоклеточной карциномы легкого. Ann. Surg. Онкол. 11, 697–704.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямамото С., Томита Ю., Хошида, Ю., Сакон, М., Камеяма, М., Имаока, С., и др. (2004c). Экспрессия валозин-содержащего белка в колоректальных карциномах как предиктор рецидива заболевания и прогноза. Clin. Cancer Res. 10, 651–657.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямамото С., Томита Ю., Хосида Ю., Тойосава С., Инохара Х., Кишино М.
и др. (2004d). Уровень экспрессии валозинсодержащего белка (VCP) как прогностического маркера плоскоклеточного рака десны. Ann. Онкол. 15, 1432–1438.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Ямамото С., Томита Ю., Хосида Ю., Такигучи С., Фудзивара Ю., Ясуда Т. и др. (2003). Уровень экспрессии валозинсодержащего белка тесно связан с прогрессированием и прогнозом рака желудка. J. Clin. Онкол. 21, 2537–2544.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Yeung, H.O., Kloppsteck, P., Нива, Х., Исааксон, Р.Л., Мэтьюз, С., Чжан, X., и др. (2008). Понимание связывания адаптера с белком AAA p97. Biochem. Soc. Пер. 36, 62–67.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Инь, Ю., Зейферт, А., Чуа, Дж. С., Мор, Дж. Ф., Голебиовски, Ф., и Хэй, Р. Т. (2012). SUMO-нацеленная убиквитин E3-лигаза RNF4 необходима для ответа человеческих клеток на повреждение ДНК. Genes Dev.
26, 1196–1208.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Чжан, Х., Ван, К., Каджино, К., и Грин, М. И. (2000). VCP, слабая АТФаза, участвующая во множестве клеточных событий, физически взаимодействует с BRCA1 в ядре живых клеток. DNA Cell Biol. 19, 253–263.
Pubmed Реферат | Pubmed Полный текст | CrossRef Полный текст
Масло для коробки передач ваз 21099 что купить. Какое масло заливать в коробку Ваз21099? (-)
Статья будет полезна не только владельцам ВАЗ 2109, кроме данной модели она применима как к 21099, так и к 2108, так как коробки передач в этих моделях абсолютно идентичны.В целом замена масла в МКПП ВАЗ 2109 (21099) процесс довольно простой и может быть выполнен своими руками. Но обо всем по порядку.
Возможные причины замены масла
Стоит отметить, что у модели 2109 (21099) и им подобных коробки передач, так сказать, «неубиваемые». Но у такого надежного агрегата бывают и периоды, когда для дальнейшей бесперебойной работы необходимо провести ТО в виде замены трансмиссионной жидкости.Если из коробки начал раздаваться шорох или другие шумы, агрегат издает сильные вибрации, передачи хуже переключаются и сопровождаются неприятными звуками — пришла замена масла. Для начала — проверьте уровень масла щупом (если замена была недавней), и осмотрите сам агрегат на предмет утечек. Только потом переходите непосредственно к самой замене.
Какой интервал замены масла в коробке ВАЗ 2109 (21099)
По регламенту масло меняют раз в пять лет, то есть раз в 70 тысяч километров.Но в целом не стоит так растягивать этот интервал, ведь износ коробок ВАЗ обычно довольно большой, а условия эксплуатации обычно близки к экстремальным, поэтому нужно сокращать этот период до одного раза в 40 тысяч километров.
Какое масло заливать
Самое интересное, что в МКПП ВАЗ 2109, 2108 и 21099 по регламенту разрешается заливать моторное масло, но с условием, что замена будет проводиться как в двигателе — раз в 10 — 15 тысяч километров.Но к таким мерам прибегали раньше, когда трансмиссионных масел практически не было. Сейчас ассортимент этих жидкостей настолько велик, что многие, даже заядлые автолюбители с большим стажем вождения, теряются и долго выбирают подходящую трансмиссионную жидкость. Чтобы не запутаться и получить именно то, что вам нужно, следуйте этой инструкции:
- Основное правило — не значит качественно дорого (при выборе не ориентируйтесь на цену, обычно чем дороже масло, тем выше вероятность подделки)
- Прежде всего обратите внимание на маркировку, вязкость должна быть 80W-85 или 80W-90
- Класс масла должен быть GL-4 или GL-5, что соответствует отечественной маркировке ТМ-3 и ТМ-4.
- Для автомобилей семейства ВАЗ разработаны специальные трансмиссионные жидкости, например, Rexol T, Омскойл Транс П и Volones TM4. Столкнувшись с этими брендами, не раздумывая приобретите одну из них.
- Покупайте любые масла только в специализированных магазинах и у официальных дилеров! Это очень важно, чтобы избежать подделок.
Что нужно иметь под рукой
- Четыре литра трансмиссионной жидкости (остаток доливается во время работы). Точное количество заливаемого масла в коробку передач составляет три литра для четырехступенчатой коробки передач и три с половиной литра для пятиступенчатой коробки передач (Ответьте на вопрос, сколько масла следует заливать).
- Подходящее место (смотровая яма, эстакада что лучше — на ваш выбор)
- Воронка, желательно большого диаметра и с длинным концом (для удобства).
- Ключ или голова на «17», можно и то, и другое.
- Старые тряпки, руки щупом протереть, может для чего еще.
- Большой таз для слива отработанной жидкости и бутыль для перелива и последующей ее утилизации (подойдет пятилитровая канистра).
- Кроме того, если у вас коробка передач без щупа, вам понадобится специальный шприц, гибкий шланг длиной от 20 до 25 сантиметров.
- Тонкий провод и изолента.
Это самое основное, что вам непременно понадобится в процессе выполняемой работы.
Прямая замена (МКПП с датчиком)
В процессе эксплуатации проверяем уровень жидкости каждые 10-15 тысяч километров во избежание поломок трансмиссии из-за низкого уровня масла. Если коробка потребляет много масла, заменяйте как можно чаще.
Процесс замены масла (МКПП, в которой щуп не предусмотрен)
Заключение
Как видите, заменить трансмиссионную жидкость довольно просто и обращаться для этого в сервисный центр не стоит.Все это можно сделать самостоятельно, тем самым сэкономив деньги и время ожидания. И не забывайте по окончании всех работ проверять уровень трансмиссионной жидкости.
Если допустить снижение уровня смазочной жидкости в механической коробке передач автомобиля ВАЗ 2109 и его модификаций, может возникнуть масляное голодание узлов коробки передач и, как следствие, выход из строя агрегата. Поэтому автовладельцу нужно знать сколько.
[Скрыть]
Периодичность замены
Инструкция по эксплуатации автомобиля ВАЗ 2109 и его модификаций рекомендует менять смазку в коробке передач машины через 75 тысяч километров пробега.В случае, когда годовой пробег незначителен, эту процедуру проводят после пяти лет эксплуатации машины.
Некоторые водители меняют смазку через 12 месяцев эксплуатации, это не противоречит рекомендациям производителя автомобиля, но экономически нецелесообразно. Поскольку современные расходники за такой срок не теряют своего качества. Но иногда может потребоваться незапланированная замена масла, если оно по какой-то причине протекает, а тип смазки неизвестен.
Подбор масла
Первые экземпляры ВАЗ 2109 имели карбюратор в системе питания и оставались коробкой передач, которая была четырехступенчатой. В ее картер заливали рекомендованную моторную смазку, что обеспечивало работоспособность агрегата как летом, так и зимой. После замены главной гипоидной передачи на детали косозубой передачи потребовалось масло улучшенного качества. Таким образом, смазочные материалы ТМ-1 и ТМ-2 хорошо себя зарекомендовали. Кроме того, разработана и внедрена в производство трансмиссионная жидкость Лукойл ТМ-5.
Специалисты советуют использовать в трансмиссиях ВАЗ 2109 и их модификациях смазочные материалы, соответствующие стандартам API GL-4. Если владелец не знает, какая смазка в коробке его Девятки, лучше всего использовать смазку класса API GL-4. Масло ТМ-4 или ТМ-5-9П также отвечает соответствующим требованиям. К сожалению, последний вид смазки сложно найти в продаже, поэтому его можно успешно заменить маслом ТМ-4-12. Допускается использование жидкостей, соответствующих классу 75W-90, 80W-85, 80W-90 любых производителей, но при условии наличия у них высоких показателей качества.
Контроль уровня и требования к объему
Ремонт вышедшей из строя КПП ВАЗ 2109 — операция не из дешевых, поэтому проверяйте уровень смазки регулярно. Специалисты рекомендуют делать это каждые 5 тысяч километров или раз в год. Если обнаружен низкий объем масла, долейте его. Это обеспечит долгую жизнь коробке.
Для проверки уровня масла в КПП нужно использовать смотровую яму или эстакаду. В этом случае машину следует разместить так, чтобы правая сторона была несколько приподнята.Это легко сделать, подложив под колесо доску, кирпич или другой подходящий предмет. Затем можно приступать к проверке уровня смазки в КПП «Девятки».
Обслуживается
Этим словом водители называют автомобили с пятиступенчатой коробкой передач, у которых в моторном отсеке рядом с аккумулятором находится измерительный щуп. Они контролируют уровень смазки. Перед извлечением зонда область вокруг него тщательно протирают от грязи и пыли, чтобы он не упал в корпус.После этого зонд снимается и протирается тряпкой, после чего устанавливается на свое место. Теперь счетчик нужно снова снять и посмотреть на след трансмиссионной жидкости. Он должен находиться между двумя отметками MIN и MAX. Если это так, вы можете продолжать использовать машину.
Проверка уровня смазки щупом в коробке передач ВАЗ 2109
Инструкция по эксплуатации этого автомобиля требует заливки не менее 3,3 л жидкости в механизм трансмиссии.Специалисты рекомендуют немного увеличить этот объем смазки до 4. Объясняют это тем, что детали пятой передачи отделены от основного механизма и периодически у них может возникать «масляный голод».
Необслуживаемый
Так называется КПП первых выпусков ВАЗ 2109, которые не оснащались пятой передачей. Для контроля уровня смазочной жидкости в таких автомобилях есть заливное отверстие. Чтобы проверить количество смазки, наливную пробку немного откручивают ключом на 17, чтобы сбросить давление воздуха.Если из отверстия выступила смазка, значит, ее уровень в норме. В противном случае долейте смазку. Кроме того, через отверстие для установки привода спидометра можно проверить, достаточно ли смазки в агрегате. В нем хорошо виден уровень жидкости, и доступ под машину не требуется.
По инструкции в четырехступенчатую коробку передач ВАЗ 2109 входит трехлитровое масло. Но приобретать смазку тоже желательно в количестве 4 л. Небольшое количество жидкости может потребоваться для доливки картера коробки передач во время работы машины.
Доливка масла
Сколько масла заливается в коробку ВАЗ 2109, уже известно, можно приступать к доливу. Процесс добавления смазки в необслуживаемые и обслуживаемые боксы отличается, это связано с конструктивными особенностями этих агрегатов. Важно учитывать, что следует добавлять только смазку того типа, который используется в этой коробке передач.
В четырехступенчатых агрегатах смазка заливается через заливное отверстие, доступ к которому возможен только снизу моторного отсека.Процедура проводится шприцем для жидких масел. На нос надевают гибкий шланг и доступным способом фиксируют на шприце. Затем устройство вставляется в заливное отверстие и добавляется смазка. Заливать масло в коробку нужно до нужного уровня.
Для пяти шагов этот процесс отличается. Вы можете добавить необходимое количество смазки через отверстие щупа. Место его установки тщательно протирается тряпкой от грязи, затем щуп вынимается из гнезда.Доливать удобно при помощи шприца, резиновой груши большого объема или воронки. Устройство устанавливают в мерное отверстие и доливают нужное количество масла.
Замена масла своими руками
Эту операцию можно выполнить самостоятельно, так как при замене смазки особых сложностей не возникает; не требуется специального оборудования или инструментов.
Мануалом как поменять смазку в КПП ВАЗ своими руками поделился канал РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ ВАЗ 2101-2107.
Инструменты и материалы
Для замены подготовьте следующее:
- Новая смазка для заправки коробки передач. Объем жидкости зависит от конструкции механизма.
- Пустая емкость для сбора отработанной жидкости, емкость которой должна быть чуть больше 3 литров.
- Тряпки.
- Ключи накидные на 12 и 17.
- Шприц со шлангом для редуктора без зонда, воронка или резиновая груша для ящиков с зондом.
Перед началом работ необходимо прогреть смазку в трансмиссии, для этого достаточно проехать 10 км.
Слить масло
Перед заливкой новой смазочной жидкости необходимо слить старое масло с истекшим сроком годности. Этот процесс занимает не более 15 минут.
Процедура будет следующей:
- Машина установлена на подъемнике или смотровой яме.
- Тряпкой протереть заглушки заливного и сливного отверстий.
- Ключом на 17 немного откручиваем крышку заливной горловины, чтобы выпустить воздух из коробки передач.
- Пустые емкости помещаются под сливное отверстие и откручивается пробка.
- Шахта сливается, по окончании истечения жидкости крышка ставится на место.
Пока сточная жидкость сливается, проверьте сливную пробку на наличие металлической стружки. Если он обнаружен, промойте картер коробки передач.
Слив масла из КПП ВАЗ 2109
Залить новое масло
Алгоритм заливки масла в обслуживаемых и необслуживаемых КПП ВАЗ 2109 такой же, как и при доливке масла.
Заправка свежим маслом
Как еще можно добавить смазку?
Чтобы залить необходимое количество свежей смазки, можно прибегнуть к другому методу.
Данная операция проводится через место установки привода спидометра:
- Тщательно очистить место возле привода спидометра от различных загрязнений.
- Затем отверните гайку крепления троса спидометра.
- Привод спидометра отложен и закрыт от возможных загрязнений.
- Залейте смазку в большую резиновую грушу — чем она больше, тем быстрее пойдет процесс добавления.
Требуемый уровень трансмиссионного масла в коробке определяется появлением смазки из заливного отверстия.Как только вы видите струю жидкости, заливную пробку необходимо завернуть.
В ролике с канала Home Master можно узнать о процедуре замены масла в КПП ВАЗ 21099, которая аналогична процессу в ВАЗ 2109.
Цена вопроса
При невозможности самостоятельной замены Трансмиссионную смазку в Девятке владельцы обращаются в сервисные центры или СТО. Стоимость такой операции определяется несколькими факторами и будет зависеть от типа смазки, количества жидкости, а также категории сервисного центра.Цена 4 литров трансмиссионного масла на ВАЗ 2109 примерно 1300 рублей. Оплата выполненных работ может варьироваться от 300 до 500 рублей.
Последствия несвоевременной замены
При несоблюдении периодичности замены смазки в КПП ВАЗ 2109 могут возникнуть следующие проблемы:
- При «масляном голодании» в агрегате, износе шестерен, синхронизаторы и подшипники в коробке ускоряются.
- Превышение срока использования смазки приводит к ухудшению ее технических характеристик.
- Происходят изменения химического состава масла, что неизбежно сказывается на качестве смазки трущихся элементов.
- В результате ускоряется выход деталей из строя, продукты их износа в виде металлической стружки могут привести к заклиниванию коробки передач.
- Низкий уровень масла ухудшает охлаждение коробки передач во время движения.
Фотогалерея
Масло Лукойл TM-4 Масло LIQUI MOLY 75W-90 Масло ZIC G-FF
Сам ничего посоветовать не могу: не специалист.Но приведу
дословно
выводы теста «Езда» (не буду приводить всю статью — крупно):
ВМЕСТО ВЫВОДОВ
Увы, «лучшего» масла для самарской КПП НЕТ. Чем сильнее забота о передачах, тем хуже условия работы синхронизаторов. Чтобы и волки были накормлены, и овцы были в безопасности — не работает. Однозначны только две рекомендации: остерегайтесь подделок (ха-ха, удивлен!) И не используйте трансмиссионные масла группы ТМ-5 (GL-5) для G8, Девяток, Десяток и Оки.Не стоит «кормить» эти механизмы высоковязкими маслами — моторными 5W50 (10W50 и др.) Или трансмиссионными 85W90. Подойдет мотор 15W40 (10W40) или трансмиссия 75W80. Рекомендован ВАЗ ТМ-4-12 — очень хорошо, если только не подделка.
Но мы так и не ответили на главный вопрос: что лучше — мотор или трансмиссия? Кто внимательно прочитал, наверное, догадались. Моторное масло лучше для синхронизаторов, трансмиссионное масло для шестерен. Теоретически это означает, что использование моторного масла позволит реже перебирать коробку для замены синхронизаторов, но общий срок службы агрегата, определяемый износом шестерен, будет меньше.4) в агрегатах переднеприводных машин (с цилиндрической главной передачей). Допустимый диапазон применения вязкости: для 75W-80 — от -40 до + 25 ° С. Для 80W-85 — от -30 до + 35 ° С. для 80W-90 от -ZODO + 45 ° С.
Для переднеприводных ваз теперь рекомендуется несколько трансмиссионных масел, но разрешены и моторные масла. Из трансмиссий в продаже удалось найти только ТМ-4-12, представленные в тесте. Масло для первой заправки ТМ-5-9П в розничную продажу не поступает.
Удачи
*** Всего доброго ****** Не кашляй ***
На выходных залил
Mannol Basic 80W-85 GL-4.360 руб. за 4л. Там написано, что специально для России передний привод. Коробка стала заметно тише. Что было до этого — не знаю.
С уважением, Антон.
Re: Какое масло заливать в коробку ВАЗ21099?
Всем спасибо !!!
Залил себе масло
Равенол GL-4. Пока доволен, зимой коробка тоже нормально работала. И масло недорогое.
Re: Какое масло заливать в коробку ВАЗ21099?
Любая импортная трансмиссионная синтетика или полусинтетика ГЛ-4.
Розовая мечта 90-х
Автомобиль ВАЗ-21099 до сих пор пользуется большой популярностью не только в России, но и практически во всех странах СНГ. Он на удивление ремонтопригоден — вы можете справиться с большинством поломок самостоятельно. Одна из наиболее частых операций, которые вам необходимо делать — это замена масла и диагностика системы смазки двигателя и коробки передач. Смазка в двигателе ВАЗ играет очень важную роль, поэтому перед каждым выездом следует внимательно осматривать автомобиль и его парковку. Вам также потребуется максимальное внимание, если индикатор давления масла внезапно мигает.Это может свидетельствовать как об утечке, так и о более серьезной поломке.
Замена моторного масла
Даже если автомобиль больше простаивает, чем ездит, масло в двигателе ВАЗ следует менять дважды за сезон. Это связано с разной вязкостью масел, что особенно актуально для регионов с очень суровым климатом. Например, масло с индексом 5W или даже 0W будет намного лучше обеспечивать холодный запуск, чем 10W или 20W. Хотя если на ВАЗ 21099 установлен инжектор, а климат более-менее теплый, то менять масло два раза в год не нужно.Еще один критерий работы — пробег. Замена масла должна производиться 1 раз на каждые 10-15 тысяч км.
Сама процедура предельно проста. Перед заменой нужно приобрести 3,5 литра нового и промывочного масла, масляный фильтр. Машину загоняют на подъемник или яму. Двигатель необходимо хорошо прогреть — иначе масло не сойдет полностью. Естественно заклинило двигатель ВАЗ. Настраивается рабочий бак, аккуратно откручиваются сливная пробка в картере и крышка заливной горловины в верхней части мотора.Соблюдая осторожность, необходимо дать стечь всему маслу.
После того, как масло стекло, завинчивается сливная пробка, заливается промывочное масло. Мотор запускается, он должен проработать несколько минут. С промывочным маслом нельзя ездить, особенно если на машине стоит инжектор ВАЗ 21099. Затем мотор снова останавливается, масло снова сливается, масляный фильтр откручивается. Перед установкой нового масляного фильтра тщательно смажьте его резиновую прокладку. Пробки снова прикручены — работа сделана!
Шестиступенчатая коробка передач
Если после замены лампочка давления масла начинает мигать, то необходимо немного подтянуть масляный фильтр, а также проверить мотор на герметичность.Возможно, одна из прокладок начала травиться. Также это может указывать на то, что сломался датчик давления масла или произошла более серьезная поломка.
Стоит помнить, что промывку мотора производить только при заливке масла другой вязкости или марки. В остальных случаях промывка мотора производится по желанию. Желательно совместить такую процедуру с такой важной операцией, как замена антифриза. Когда все жидкости в двигателе новые, водитель может не беспокоиться о состоянии своей машины.
При замене жидкостей не сливайте их на землю — это может сильно навредить окружающей среде.
Замена смазки в коробке передач
Каждые 50-75 тыс. Км требуется замена масла в КПП ВАЗ. Сделать это можно раньше, например, когда начала гудеть трансмиссия, а починить нет возможности. Если налить более густое масло, шум временно исчезнет. Что касается того, сколько масла нужно залить, его объем для штатной коробки передач составляет 3 литра.Если коробка пятиступенчатая, то нужно около 3,3 литра. По инструкции вязкость масла должна быть 80W-85.
Есть два типа коробок передач ВАЗ-21099. Первый — старые коробки без стилуса. Для замены масла им понадобится специальный шприц. Ко второму типу относятся современные модели с зондом. С ними вся процедура не сложнее замены антифриза.
Вот так меняют смазку в коробке передач
Итак, перед работой необходимо максимально очистить металл возле сапуна и заливной горловины от грязи.Далее снимается резиновая заглушка на сапуне, а само отверстие зачищается чистой проволокой или шилом. После этого емкость заменяется, сливной болт отворачивается и масло начинает течь. Перед процедурой необходимо снять и протереть зонд. Операцию лучше проводить после непродолжительной поездки, лучше всего в теплом боксе, чтобы масло было как можно более жидким. После всего стекла завинчивается пробка и заливается новое масло. В старых ящиках уровень проверяют по нижнему краю маслозаливного отверстия, в новых — щупом.
Конечно, операция занимает больше времени, чем замена антифриза, но тогда не нужно проверять большое количество шлангов и патрубков. Если после замены масла гудение в коробке передач не уходит, то придется полностью перебирать коробку передач. После тест-драйва рекомендуется еще раз проверить уровень масла.
Трансмиссионное масло необходимо заменять после длительного простоя. Сделать это стоит после покупки автомобиля, ведь неизвестно, что заливал предыдущий хозяин в трансмиссию и следил ли за уровнем смазки.
Стоит отметить, что замена масла в КПП ВАЗ 21099 — один из важнейших моментов в уходе за автомобилем. Масло обеспечивает равномерную смазку фрикционных элементов трансмиссии, а также служит охлаждающей жидкостью, снимая температуру с нагретых поверхностей деталей.
Теория.
Замену масла в КПП на ВАЗ 21099 следует проводить через каждые 75 тысяч километров пробега или не реже чем через четыре-пять лет.Учтите, что в 5-ступенчатую коробку передач можно заливать 3,3 литра масла, а в 4-ступенчатую — 3,0 литра. Есть прямые рекомендации завода по использованию трансмиссионного масла.
Замена масла в КПП как таковая «горячая», то есть сразу после поездки, когда масло теплое и в более жидком состоянии. Эта работа проводится на смотровой яме или подъемнике.
Верхняя отметка на щупе — оптимальный уровень трансмиссионного масла в коробке передач; не рекомендуется заливать выше указанной отметки, так как в этом случае масло может вытечь из коробки передач.Нижняя отметка на щупе — это минимально допустимый уровень, после которого необходимо долить масло в коробку. Если этого не сделать или вовремя не заметить, деталям коробки передач может быть нанесен непоправимый вред, после чего она очень скоро выйдет из строя.
Запчасти на Лада Нива 4х4 | Ремкомплект ступицы переднего колеса 2 подшипника + 2 сальника + Гайка: Лада Нива 2121 ОРИГИНАЛ !!!! АВТОВАЗ !!!!
Запчасти на Лада Нива 2121 и Лада седан 2101-2107
В нашем интернет-магазине вы найдете практически все запчасти для вашей Лада Нива.В наш ассортимент входят генераторы, выхлопные системы, карданный шарнир, валы, карбюратор, распределитель, тормозной цилиндр, тормозной суппорт, поворотники, зеркала, тормозные колодки, фары, кабель зажигания, кабель спидометра, прокладки, воздушные фильтры, масляные фильтры, резервуар для жидкости. , ремни, амортизаторы и многое другое. У нас есть в наличии руководство по ремонту на немецком, английском и французском языках для ремонта и обслуживания вашей Lada Niva. Если у вас есть вопросы или вы не можете найти нужную деталь, напишите нам или позвоните нам.
Вы можете найти следующие категории:
Ведущий вал / дифференциал привода Лада Нива, Мосты Лада Нива, Лада Нива Подвеска
Продольная штанга, стабилизатор поперечной устойчивости, шаровые опоры, пружины, амортизаторы
Выхлопная система Лада Нива
Выхлоп, глушитель, центральный глушитель, водосточная труба, выхлопные хомуты, коллекторы, катализатор для Lada и Lada Niva
Авто / лак для краски для Lada и Lada Niva
Автомобильные краски / краски или спрей в баллончике и в качестве цветного карандаша специально для Lada
Лада Нива Освещение для Лада и Лада Нива
Фары, задние фонари, стоп-сигналы, поворотники, габаритные огни, рефлектор, лампа накаливания, задний фонарь, отражатели, стекла, поворотники, габаритные огни, освещение номерного знака, фонари, задние фонари, переключатель для освещения, лампы, Glübirnen Lada Niva
Тормоза тормозные детали, тормозные цилиндры для Lada и Lada Niva
: Тормоз, Bremstromel, Тормозной шланг, Тормозной шланг, Тормозные тормоза, Тормозные цилиндры, Тормозные колодки
Уплотнения + помогает Лада Нива
Прокладки + Вспомогательные средства Лада Нива: Прокладка коллектора, прокладка выхлопа, прокладка ГБЦ, прокладка поддона, прокладка карбюратора, сальник насоса, прокладка клапана подогрева, уплотнитель топливного насоса
Электро Лада Нива
Подвеска / амортизатор для Лада и Лада Нива
Бамперы, пружины, пружины подвески, листовая рессора
Фильтры: масляные, воздушные, бензиновые для Лада и Лада Нива
Фильтр масляный, воздушный фильтр, топливный фильтр
Трансмиссия, трансмиссия, раздаточная коробка, Лада Нива
Стекло, Окно, механизм стеклоподъемника, оконная ручка, для Лада Нива
Трансмиссия, трансмиссия, раздаточная коробка, комплекты подшипников
Детали интерьера Лада Нива
Стекло, окна, раздвижные окна, резиновые прокладки и все необходимое для остекления, стеклоподъемник, оконная ручка, карданный вал
Детали интерьера Лада Нива: потолок, коврик, спидометр, автомобильные часы, дверная ручка, кнопка, резиновый коврик, защита порога, панель приборов , задняя полка, рулевое колесо
Кузовные детали Лада Нива
Кузов, кузовные панели, бампер.Наклейки, Капот, Шлоссер, Ручки, Бампер
Подача топлива Лада Нива
Топливный насос, Карбюратор, Топливный шланг
Кондиционер / Отопление Лада Нива
Охлаждение, радиатор, обогрев, патрубок, электродвигатель обогрева
Сцепление
Сцепление, шланг сцепления , цилиндр сцепления, бачок сцепления, диски сцепления, комплект сцепления
Направление Лада Нива
Рулевой механизм, тяга, отклоняющая скоба, рулевое колесо, Лада Нива
АвтоВАЗ запчасти ОРИГИНАЛ Лада Нива
Найти запчасти с гарантией оригинального производителя АВТОВАЗ
Руководство по ремонту Лада Нива
Лада Нива: руководства по ремонту на французском, английском, русском и немецком языках, каталог номеров деталей, Лада, Нива
Ремкомплекты Ремкомплекты
Найти готовые к установке ремонтные комплекты
Винт, болт, хомут, крепеж, хомут, гайка
Винт, болт, хомут, застежка, хомут, гайка
Ремни безопасности
Ремни, адаптер ремня, пряжка ремня, автоматическая и статическая
Зеркало Лада Нива
Зеркала, внутреннее зеркало, зеркало
Тюнинг Лада Нива
Тюнинг Лада Нива: Экскаваторы, Молдинг, Расширители крыльев, Молдинги, Облицовка, Защитные опоры, Ветрозащитный кожух, Безумная гвардия, Эмблема, Паспортная табличка, Спортивное рулевое колесо, Ступица рулевого колеса
Мыть Лада Нива
Бачок омывателя, помпа бачка омывателя, дворник, рычаг дворника
Магазин инструментов Лада Нива
Инструменты, оборудование мастерской
Зажигание, распределитель, свечи зажигания, катушка зажигания
Кабели зажигания, свечи зажигания, зажигание, катушка зажигания, зажигание,
взорвалось
В нашем интернет-магазине вы найдете практически все запчасти
для вашей Лада Нива всех моделей 2121, 21213, 21214.Если у вас есть вопросы или вы не можете найти нужную запчасть для своей Лады, не стесняйтесь обращаться к нам.
Иск Porsche по трубопроводу охлаждающей жидкости включает Panamera и Cayenne
Владельцы утверждают, что Porsche использовал неисправную эпоксидную смолу для крепления трубок охлаждающей жидкости, в результате чего охлаждающая жидкость повсюду.— В иске Porsche по трубопроводу охлаждающей жидкости утверждается, что неисправный эпоксидный клей вызывает разъединение труб охлаждающей жидкости в автомобилях Panamera 2010-2016 и Cayenne 2011-2019, оснащенных двигателями V8.
Истцы утверждают, что в системах охлаждения двигателя используется клей для скрепления скользящих труб охлаждающей жидкости, но вибрации и тепло от обычного вождения вызывают разрушение и ослабление эпоксидного клея. Утверждается, что трубы и соединители охлаждающей жидкости разъединяются, что вызывает немедленный отказ двигателя и полную потерю мощности без предупреждения.
Охлаждающая жидкость быстро просачивается по моторному отсеку после разъединения труб, направляя охлаждающую жидкость на шины и дорогу, что создает серьезную угрозу безопасности.
Истец из Калифорнии Майкл Сюй приобрел новый Porsche Cayenne S 2012 года выпуска в 2011 году, но в апреле 2019 года автомобиль внезапно перегрелся, когда у него было около 54000 миль. Дилер подтвердил, что соединение с скользящей посадкой к корпусу распределителя охлаждающей жидкости и трубка охлаждающей жидкости на блоке термостата разделились из-за разрыва эпоксидного клея.
Техники заменили вышедшие из строя компоненты, и истец утверждает, что он был вынужден заплатить 3 834,93 доллара за запасные части, которые предположительно так же неисправны, как и оригиналы.
Истец из Нью-Йорка Дэниел Ваз-Покас приобрел подержанный Cayenne S 2012 года с пробегом примерно 60 000 миль в январе 2017 года. Четыре месяца спустя истец и его жена ехали, когда Cayenne S внезапно перегрелся и начал извергать дым из двигателя.
Он говорит, что был вынужден перевести автомобиль в НЕЙТРАЛЬНОЕ положение и смог ехать по склону моста до тех пор, пока не смог съехать на обочину. Он и его жена якобы оставались там до прибытия эвакуатора.
Дилер Porsche обнаружил, что труба охлаждающей жидкости отделилась от корпуса термостата после того, как эпоксидный клей вышел из строя.
Автопроизводитель якобы оценил ремонт примерно в 4000 долларов, поэтому истец доставил автомобиль в первоначальный дилерский центр, который подтвердил то, что предыдущий дилер сказал о трубке охлаждающей жидкости.
Истец утверждает, что оспорил стоимость и оставался без автомобиля на несколько недель, пока не согласился заплатить 800 долларов за ремонт.
По словам истцов, владельцы могут искать тысячи долларов на ремонт, потому что механики должны снять несколько компонентов двигателя, чтобы заменить вышедшие из строя детали.Может потребоваться замена нескольких компонентов двигателя, поскольку охлаждающая жидкость под давлением разбрызгивается в моторные отсеки при разделении трубок охлаждающей жидкости.
Владельцы Porsche также утверждают, что автопроизводитель заменяет неисправные компоненты деталями, которые так же неисправны, как и оригинальные компоненты, что приводит к бесконечному циклу ремонта. Однако Porsche якобы отказывается нести финансовую ответственность за предполагаемые проблемы с трубой охлаждающей жидкости и отказывается признать, что автомобили неисправны.
Компания Porsche предположительно использовала ту же клейкую эпоксидную смолу для систем охлаждения двигателей автомобилей 911 Turbo, GT3, GT3RS, GT2 и GT2RS 2001-2007 годов.Транспортные средства предположительно пострадали от внезапного отделения труб охлаждающей жидкости от корпусов термостатов из-за выхода из строя эпоксидной смолы.
В 2013 году Национальное управление безопасности дорожного движения (NHTSA) начало расследование утечек охлаждающей жидкости в автомобилях Porsche 911 2001–2007 годов.
Согласно NHTSA, « [t] он жалобы утверждал, что концы труб, соединенные эпоксидной смолой с некоторыми компонентами системы охлаждающей жидкости, могут внезапно выйти из строя и разделиться, что приведет к большим объемам утечки охлаждающей жидкости .”
Автопроизводитель ответил правительству, сказав: « Porsche выявила проблему производственного качества в связи с нанесением поставщиком клея на фитинги труб охлаждающей жидкости, что привело к увеличению количества отказов…. ”
Porsche также признал, что « не проводил специальных испытаний на долговечность клеевых соединений, используемых в фитингах трубопроводов охлаждающей жидкости ». Но истцы говорят, что Porsche сообщил NHTSA, что поставщик внес изменения в устройство, на которое нанесена эпоксидная смола, что устранило проблемы.
Согласно коллективному иску, проблемы не были устранены, и автомобили Panamera и Cayenne якобы являются тому доказательством.
Иск Porsche по трубопроводу охлаждающей жидкости был подан в Окружной суд США по Северному округу Джорджии: Xu, et al., Против Porsche Cars North America, Inc .
Истцы представлены Evangelista Worley LLC, Blood Hurst & O’Reardon, LLP и Boucher LLP.
На сайте CarComplaints.com есть жалобы владельцев на Porsche Cayenne и Porsche Panamera.
ВАЗ 2106: гандар белаканг, кпп. Пеларасан, пембайкан, пенггантян
Джика анда мендапати бахава ди ВАЗ 2106, гандар белаканг (коробка передач) терлалу панас атау менгхасилкан буньи-буньи цири, далам кес ини ханья пенггантинья акан менйеламаткан кеадаан. Иа сангат мудах унтук менгубах бутиран иници — валаупун пеминат керета пемула болех менгатасинйа.
Dan hari ini kita akan melihat bagaimana untuk menggantikan kotak gear (ВАЗ 2106 «Енам»).
Adakah saya perlu mengubahnya?
Sudah tentu, ada cara lain Untuk menyelesaikan masalah ini.Дарипада мембели бахагян бару, адалах манкин унтук мемпербайки котак передач ВАЗ 2106. Валау багайманапун, тидак дисйоркан унтук мелакукан Ини ди Гарадж, Керана анда тидак дапат менетапкан джуранг ди Джала шестерня денган бетул. Itulah sebabnya penyelesaian yang paling boleh dipercayai adalahmbeli item baru. Насиб байк, косня тидак бегиту бесар (кира-кира 4 рибу рубля), джади дари судут панданган кеванган, кос анда акан минимум.
Алат мемасак
Untuk menggantikan kotak gear belakang ВАЗ 2106 dengan cepat dan betul, kita perlu menyediakan alat berikut:
- Гаечные ключи Tetapkan dan topi penutup.
- «Плюс» дан «пемутар скру» негатиф.
- Pelarut seperti Roh Putih atau sebotol petrol.
Bermula
Untuk meneruskan pembongkaran jambatan, anda perlu memandu kereta terlebih dahulu ke lubang penonton atau melangkaui. Kemudian ia perlu mengalirkan minyak дан cabutkan batang pemacu dengan bebibir tangkat gear.
Selepas itu, gandar-gandar dikeluarkan dari mesin дан baut akhir 8 tidak dibungkus dengan bantuan bolt berduri akhir, янь menghubungkan kotak gear ke rasuk.Kemudian anda boleh mengeluarkan dengan selamat dari kereta gandar belakang ВАЗ 2106 (шестерня). Пада перингкат иници, анда болех перги дуа кара — унтук мемасанг элемент бару атау куба унтук менгали ке лама. Пада саат пертама, унсур-унсур дипасанг далам урутан тербалик, тетапи ками акан членитаху и тентанг багаймана унтук менерускан далам кеш кедуа далам бахаган берикут.
Mengenai pengedap unsur dan penggantianmereka
Perhatikan bahawa pada модель pertama «Enam», sambungan jambatan dan bebibir telah dilakukan dengan meterai dengan gasket khas.Беберапа тахун кемудиан, букання, аген кедап миньяк кедап дигунакан пада пенгантар. Oleh itu, dalam apa keadaan, perlu mengemaskini meterai ini dalam proses pemasangan terbalik.
Apa yang perlu dilakukan seterusnya? Dalam langkah seterusnya, anda perlu membersihkan permukaan penyambung reducer secara menyeluruh dari bahan pengedap, дан кемудиан обезжиривает permukaan ini dengan kain yang sebelum ini direndam dalam petrol. Джика анда menggunakan semangat Putih, berhati-hati dengan perlindungan tambahan alat perlindungan pernafasan.Selain itu, benang bolt pelekap dan lubang bagimereka yang terletak di dalam tin boleh dikenakan обезжиривание.
Selanjutnya, semua permukaan ini dirawat dengan ejen kedap tahan minyak yang baru. Benang bolt mengunci dilincirkan dengan sebatian pengunci khas.
Kemudian kotak gear jambatan dipasang di dalam rasuk dan merata (salib) diperketatkan dengan bolt. Pemasangan unsur-unsur yang selebihnya dilakukan dalam urutan terbalik. Akhirnya, perlu menuangkan minyak baru ke dalam gandar belakang.
Bagaimana untuk mencurahkan minyak?
Sebelum mendedahkan ciri-ciri penggantian, kita perhatikan bahawa arahan ini boleh digunakan bukan sahaja untuk kereta Model 2106. Алгоритма ян сама Untuk menukar minyak boleh dilihat dalam model VAZ 2101, 2102, 2104, 2105, модель 2107, 2103, 2105
Jadi, apa yang perlu kita lakukan untuk menukar minyak? Mula-mula anda perlumbuang plag longkang dengan kunci Allen. Сетерусня, ками meletakkan beberapa kapasiti дан melepaskan element pengisi.Selepas minyaknya adalah kaca yang baik, ками balikan kembali gabus dan gunakan minyak blower khas (atau picagari besar) Untuk mengepam minyak gear di sini. Tuangkan ke tahap pinggir bawah lubang. Сетерусня, pusingkan gabus, дан ini dengan selamat boleh mula mengendalikan kereta.
Kadang-kadang bahan dalam kotak gear boleh menjadi sangat kotor. Далам Кес Ини, Себелум Mencurahkan Cecair Baru, Ками Mencuci Lubang Kotak атау Kotak Gear dengan Campuran Бахан Апи Дизель Дан Миньяк (Тидак Семестинья Пенгхантаран).Далам перкадаран перги ке селитер миньяк кира-кира 300 милилитров Бахан апи дизель.
Bagaimana Untuk Menyesuaikan kotak gear VAZ 2106 melakukannya sendiri?
Operasi ini dilakukan selepas setiap pembongkaran dan pembaikan bahagian ini. Тетапи тидак семестинья. Adalah mungkin Untuk menentukan sama ada kotak gear memerlukan pelarasan dengan adanya permainan paksi gear pemacu. Ini dilakukan dengan bantuan penunjuk dengan pembahagian harga 0,01 миллиметра. Periksa tindak balas tindak balas dilakukan dengan aci kipas terputus dengan menggerakkan bebibir di arah paksi.
Kaki penunjuk dipasang di bahagian akhir flange. Dengan menyesuaikan ketegangan, pelepasan paksi di dalam galas dikeluarkan. Анда болех мембуат пеларасан ян сама dengan menyesuaikan ketebalan cincin penyesuaian. Bagaimanakah gandar belakang (коробка передач) berubah pada kereta ВАЗ 2106?
Sebelum pemasangan gear gear akhir, tandakan juga penglibatan gear. Untuk melakukan ini, anda perlu cat gigi peranti dengan beberapa cat yang terang. Ia tidak disyorkan untuk menggunakan terlalu banyak cecair untuk kerja ini, kerana ia tidak sesuai untuk sifatnya (ia hanya akan menyebar pada gigi).Тетапи ян тебал тидак болех диутамакан — иници тидак акан мемрах дари селанг антара унсур-унсур (иайту, тидак акан ада хасилня). Selepas menggunakan cat, anda mesti memutarkan gear pemacu dalam arah yang berbeza. Пада маса ян сама адалах перлу Untuk menghentikan импульс apabila ia menyentuh hamba. Ini perlu dilakukan sehingga gigi mempunyai patch kenalan yang jelas. Menurutnya, kita menentukan ketepatan pelarasan.
Jika dalam perjalanan anda mempunyai keperluan Untuk menggerakkan gear yang digerakkan, anda boleh melakukan ini dengan mengubah ketebalan set cermin.Ян terakhir dipasang di antara hujung gear дан cincin batin galas belakang.